孙旭东
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国科学院昆明植物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 拟南芥AtTCP4基因克隆及原核表达被引量：2
- 2021年
- 为进一步研究转录因子TCP4在植物生长发育过程中的调控作用和下游靶基因。利用生物信息学分析转录因子TCP4家族及其蛋白序列,扩增AtTCP4基因CDS序列、构建原核表达载体并诱导纯化获得蛋白,利用凝胶电泳迁移试验(EMSA)验证AtTCP4蛋白与拟南芥功能基因LOX2启动子区域的顺式作用元件结合。生物信息学分析表明,拟南芥TCP蛋白含有非典型的螺旋-环-螺旋(bHLH)结构域;系统进化树表明,AtTCP4属于Ⅱ类TCP蛋白;蛋白三级结构预测表明:转录因子TCP4可以形成同源或异源二聚体。特异性引物扩增获得AtTCP4基因的CDS序列,其开放阅读框(ORF)长为1263 bp。构建原核表达载体pET-28a-AtTCP4并转化到Rosetta(DE3)感受态中,经IPTG诱导、纯化和Western Blot检测证明获得AtTCP4蛋白。EMSA试验验证AtTCP4蛋白能够结合到功能基因LOX2的顺式作用元件。转录因子TCP4结合功能基因LOX2启动子区域,影响植物激素茉莉酸的生物合成,调控植物的生长发育过程。
- 雷其冬孙旭东徐慧妮
- 关键词：拟南芥转录因子TCP原核表达蛋白纯化
- 转录因子TCP4参与植物生长发育和抗逆调节研究进展被引量：2
- 2021年
- 转录因子TCP(TEOSINTE BRANCHED1,CYCLOIDEA,PROLIFERATING CELL FACTORS)家族具有bHLH(basic-Helix-Loop-Helix)二级结构域,根据结合位点碱基序列不同,将TCP家族分为两大类:Ι类(GGNCCCAC)和Ⅱ类(GTGGNCC)。转录因子TCP4是植物特有的转录因子Ⅱ类TCP家族成员之一,调控植物的生长发育,影响多种植物激素的合成,参与植物抗逆调节。本研究综述了转录因子TCP4与植物其他转录因子家族相互作用参与植物种子萌发、表皮毛分化、叶片形态、开花等重要植物生长发育过程,以此适应外界不断变化的生长环境。植物在生长发育过程中会遇到各种不利环境,从而对其造成逆境胁迫。在非生物胁迫下转录因子TCP4与功能基因的顺式作用元件结合调控其表达,调控植物激素的合成,从而参与植物抗逆。在植物发育过程中TCP4还具有时空限制的表达模式,这些表达模式提高了TCP4在局部触发或拮抗激素信号传导的可能性。为转录因子TCP4如何调控植物生长发育和精准的参与植物激素合成提供参考依据和理论基础,对植物生长调节和逆境下优良品种的选育有重要指导意义。
- 雷其冬孙旭东徐慧妮
- 关键词：生长发育植物激素
- 一种紫乐锦组培方法
- 本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种紫乐锦组培方法。本发明的紫乐锦组培方法中应用了组培培养基，所述组培培养基包括丛生芽诱导培养基、继代增殖培养基和生根培养基；在本发明提供的组培培养基中，NAA促进紫乐锦生根；适宜...
- 陈倩王广艳孙旭东杨雅杨永平
- 垫柳的组织培养方法
- 本发明提供一种垫柳的组织培养方法。该方法主要利用垫柳的带腋芽枝条、嫩叶片两种外植体进行组织培养，实验结果确定2000lux光照强度，温度26℃，愈伤组织诱导培养基：MS+0.1mg/L 6‑BA+0.1mg/L NAA，...
- 向楠孙旭东杨永平
- 文献传递
- 丝颖针茅ScTIP1;1基因的克隆及对非生物胁迫的应答被引量：1
- 2016年
- 利用丝颖针茅(Stipa capillacea Keng)一条EST序列并结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆了丝颖针茅的一个液泡膜内在蛋白(tonoplast intrinsic proteins,TIPs)基因ScTIP1;1的全长编码区序列。该基因开放阅读框长度为753 bp,编码250个氨基酸,其蛋白质分子量为25.8 kD,理论等电点为6.16;序列比对及系统进化分析表明,ScTIP1;1和拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtTIP1;1蛋白的亲缘关系较近;亚细胞定位结果显示,该蛋白位于液泡膜上;实时荧光qRT-PCR检测表明,盐、干旱及低温胁迫可诱导ScTIP1;1基因的表达,且低温处理后基因的表达量变化最为明显。本研究结果为理解丝颖针茅的生态适应性提供了理论依据。
- 董超杨云强孙旭东李雄杨时海黄蓉杨永平
- 关键词：分子克隆基因表达非生物胁迫
- 拟南芥LBD15互作蛋白的筛选和鉴定
- 2019年
- 为了进一步挖掘拟南芥LBD逆境胁迫响应基因在植物非生物逆境胁迫应答中的作用,探究拟南芥逆境胁迫响应机理,将前期筛选到的LBD15基因构建到pGBKT7酵母表达载体上,筛选与LBD15互作的蛋白。利用酵母双杂交技术筛选了拟南芥全长均一化的酵母文库,在本次筛库试验中,146个样有107个测出序列,通过NCBI Blast分析,其中有96个获得了基因号,占总数的87.9%。根据基因号进行分类,得到了48个蛋白,在筛选到的48个蛋白中有59%的蛋白都是有重复的。然后把基因号通过网站TAIR(www.arabidopsis.org/index.jsp)查找其蛋白序列,通过亚细胞定位预测网站(http://cello.life.nctu.edu.tw/)分析其亚细胞定位,定位分析结果表明,这些蛋白主要定位于叶绿体、细胞质和细胞核。利用Blast2GO进行Gene Ontology注释显示互作蛋白共参与了14个生物过程,包括细胞过程、代谢过程、刺激响应、生物过程的调控、单组织和多组织过程及发育进程调控等。对得到的可能互作蛋白随机挑选了5个进行了互作蛋白的分离和回复验证,结果发现,AP19蛋白及其他一些蛋白的菌落能够在营养缺陷型的平板上正常生长,进一步证实了其为互作蛋白。酵母双杂交文库的成功筛选为进一步研究拟南芥LBD15的分子作用机制奠定了基础。
- 郭兆来孙旭东杨永平徐慧妮
- 关键词：拟南芥酵母双杂交系统
- 拟南芥NBS1互作蛋白的筛选和鉴定
- 2023年
- 【目的】筛选拟南芥中NBS1的互作蛋白,探究NBS1蛋白的新功能,为后续研究奠定基础。【方法】利用酵母双杂交技术筛选拟南芥c DNA文库,对得到的序列进行BLAST比对、亚细胞定位分析和基因本体注释。【结果】共有221个阳性克隆,测序后通过BLAST比对得到97个与NBS1互作的蛋白,包括膜蛋白、转运蛋白和折叠蛋白等,它们主要定位于细胞质、细胞核和叶绿体等,主要富集于4个分子功能、5个细胞组分和13个生物过程。【结论】拟南芥中与NBS1互作的蛋白在刺激响应、信号转导和细胞代谢等方面发挥着重要作用,也证明NBS1是一种多功能蛋白,但其功能及分子机制还需进一步研究。
- 吴钒漳孙旭东徐慧妮
- 关键词：拟南芥酵母双杂交
- 不同居群紫花针茅响应干旱胁迫的生理和分子差异分析（英文）被引量：3
- 2015年
- 紫花针茅(Stipa purpurea)在青藏高原沿广阔的降水梯度分布。长期的适应过程中,不同地域的紫花针茅可能对干旱具有不同的响应方式。本研究以两个居群的紫花针茅为材料,对干旱胁迫14天和随后的复水过程中各自的生理和分子水平的变化差异进行研究。结果发现两个居群的紫花针茅在植株死亡率、叶片相对含水量、叶绿素荧光、活性氧积累、脯氨酸含量、抗氧化酶活性和抗旱相关基因表达量的变化等方面都有明显差异;且复水后各项指标的恢复水平也不相同。分析表明来自降水较少的普兰地区的紫花针茅的后代与来自降水较多的措勤地区的相比表现出更强的耐旱性,说明不同居群的紫花针茅对干旱的响应差异可能是遗传性。本研究有助于认识紫花针茅在环境中的适应和进化,以及对气候变化的响应。
- 李雄杨时海杨云强尹欣孙旭东杨永平
- 关键词：青藏高原干旱
- 拟南芥Rboh基因家族成员的分子和功能学比较（英文）被引量：2
- 2015年
- 活性氧(reactive oxygen species,ROS)在植物的信号转导中起着重要的作用。它们参与了植物的生长发育,生物及非生物胁迫和细胞死亡等过程。最近的研究发现呼吸爆发氧化酶(Respiratory burst oxidase homologues,Rboh)是植物ROS的主要生产者。拟南芥Rboh基因家族由10个成员组成,他们编码的蛋白包含6个跨膜结构域、以及C末端的FAD与NADPH亲水结构域和N末端的2个Ca2+结合EF手性结构。本文通过聚类分析发现拟南芥Rboh基因家族成员的三个分枝具有高度的同源性,这说明拟南芥Rboh家族成员间可能存在功能冗余。利用RT-PCR分析了各基因成员的时空表达特性,并对整个家族成员的缺失突变体进行表型分析发现,除了rboh C外,都没有明显的表型变化,这说明拟南芥Rboh C可能在植物发育过程中具有特殊的功能。
- 孙旭东胡向阳杨永平
- 关键词：NADPH氧化酶
