辛宁
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：潍坊医学院基础医学院山东省高校免疫学重点实验室更多>>
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- 人OX40单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定
- 2010年
- 目的 应用杂交瘤技术,制备鼠抗人OX40单克隆抗体.方法 以本室纯化的OX40胞外段融合蛋白免疫6～8周龄的雌性BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞阳性克隆.用杂交瘤细胞接种小鼠腹腔诱生腹水,腹水经饱和硫酸铵纯化沉淀后用间接ELISA法测定抗体的Ig类别.SDS-PAGE分析抗体的纯化程度,用免疫组化技术鉴定单克隆抗体与表达有OX40分子的组织及细胞特异性结合的情况.结果 获得1株能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞株诱生的小鼠腹水纯化后抗体纯度较高,Ig类别为IgG,蛋白浓度为6.129g/L.制备的单抗经淋巴细胞免疫组化及炎性淋巴组织免疫组化技术初步鉴定结果表明,该抗体与OX40单克隆抗体标准品制剂相比具有类同的特异性.结论 成功获得能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体具有较高的纯度和活性.
- 崔杰辛宁冯永堂鞠吉雨王成伟刘艳菲苗乃法
- 关键词：OX40单克隆抗体杂交瘤
- 人OX40融合蛋白的表达及其纯化
- 2009年
- 目的表达含有人OX40胞外段的融合蛋白,纯化目的蛋白,为下一步制备抗人OX40单克隆抗体及鉴定打下良好的基础。方法采用冰冷热击法将测序正确的pET32a-OX40胞外段的重组质粒转入表达菌株BL2l(DE3)的感受态细胞,接种于含氨苄青霉素的培养基筛选出阳性克隆。将阳性克隆细菌用IPTG诱导培养,收集不同时间的培养产物,离心分离菌体,取菌体超声破菌,离心收集胞质上清和包涵体沉淀,进行SDS-PAGE分析,观察不同时间条件对目的蛋白表达的影响及目的蛋白分布情况,筛选优化表达条件。采用Ni离子亲合层析柱纯化目的蛋白,然后使用超滤管对蛋白进行脱盐处理,并用核酸蛋白检测仪测定目的蛋白的浓度。结果筛选到表达pET32a-OX40的阳性菌株SDS-PAGE电泳表明,含有重组质粒的表达菌株经IPTG诱导后,在蛋白Marker的31.0～42.7kD之间出现了新的融合蛋白带,在胞质和包涵体中均有目的融合蛋白的表达。优化表达条件分析表明,在诱导的不同时间内新蛋白的表达量没有明显差别用Ni离子亲和层析柱纯化的蛋白经超滤管进行脱盐处理后,获得的目的蛋白含量为56.266g/L。结论成功获得表达pET32a-OX40的阳性菌株;
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- 关键词：纯化单克隆抗体
- 人类CD252基因片段在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析
- 2009年
- 目的优化表达含人类CD252胞外段的融合蛋白,纯化目的蛋白,为单克隆抗体的制备打下良好的基础。方法将测序正确的pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒转入表达菌株BL21感受态细菌中,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,通过改变pET32a(+)-CD252阳性菌株的诱导时间、温度,以优化出最佳表达条件。采用包涵体纯化法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BalB/C小鼠,采用ELISA法测定血清中抗体效价。结果成功获得表达pET32a(+)-CD252的阳性菌株。转化有pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒的表达菌经IPTG诱导后,在蛋白分子量标准的31.0～42.7kD之间出现了新的蛋白条带,新的蛋白主要存在于包涵体中。优化表达条件分析表明,在诱导4h、温度37 ℃、IPTG浓度为1.0mmol/L时,融合蛋白的表达量最高。包涵体洗涤纯化后,经SDS-PAGE电泳证明可得到较纯的目的蛋白。免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1:3200。结论pET32a(+)-CD252胞外段原核表达载体能够表达CD252蛋白,并获取了目的蛋白的优化表达条件,表达蛋白具有良好的免疫原性。
- 王成伟潘新宇冯永堂辛宁鞠吉雨苗乃法
- 关键词：融合蛋白纯化单克隆抗体免疫原性
