樛跃
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：大连大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- A型产气荚膜梭菌α毒素His-68基因的定点突变与结构分析被引量：3
- 2010年
- 利用定点突变技术,将A型产气荚膜梭菌α毒素(CPA)第68位组氨酸(CAT)定点突变成甘氨酸(GGT),构建了含CPA突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-H68G)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pMCPA-H68G含有CPA-His68Gly突变基因,且基因序列和阅读框架正确。重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-H68G)表达产物经SDS-PAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的31.65%。应用EXPASY服务器上的SOPMA法对CPA和CPA-His68Gly突变体分子进行二级结构的预测,同时模拟了其三级结构。结果显示,CPA和CPA-His68Gly突变体的二级结构主要是由α螺旋和无规则卷曲组成的,三级结构非常相似。
- 许崇波樛跃许崇利高凤山窦永喜才学鹏
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素基因定点突变
- A型产气荚膜梭菌α毒素Thr-272基因定点突变与结构分析被引量：3
- 2012年
- 利用定点突变技术,将A型产气荚膜梭菌α毒素(CPA)第272位苏氨酸(ACA)定点突变成脯氨酸(CCG),构建了含CPA突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-T272P)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pMCPA-T272P含有CPA-Thr272Pro突变基因,且基因序列和阅读框架正确。重组菌株BL21(DE3)(pMCPA-T272P)表达产物经SDS-PAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的18.34%。应用ExPASy服务器上的SOPMA法对CPA和CPA-Thr272Pro突变体分子进行二级结构预测,同时模拟了其3D结构。结果显示,CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的二级结构主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成,3D结构非常相似。CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的圆二色(CD)光谱分析发现二者的CD光谱有一些微小变化。磷脂酶C活性检测结果表明,CPA-Thr272Pro突变体蛋白失去了α毒素的磷脂酶C活性。免疫试验结果表明,用CPA-Thr272Pro突变体蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的A型产气荚膜梭菌标准株C57-1毒素攻击。
- 樛跃许崇波
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素基因定点突变圆二色光谱
