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东方粘虫V-ATP酶a、d和C亚基的克隆、表达及多克隆抗体的制备: 靶标的创新是新农药创制的基础，探究药物的作用靶标可以为新农药的创制提供思路，以天然产物为探针是发现新靶标的重要途径。东方粘虫（Mythimna separata）属鳞翅目夜蛾科，是禾本科作物的主要害虫。东方粘虫中肠上皮细...; 金朵; 关键词：东方粘虫多克隆抗体农药创制药物靶标; 文献传递

生物农药:使有害生物综合治理(IPM)切实服务于农民和种植者: 2015年; 在SCI生物资源团队的帮助下，欧洲有害生物综合治理中心（EUCIPM）、天然源物质研究中心（NRI）和欧洲网络企业（EEN）于2014年4月10日在格林威治大学共同举办了关于生物农药的第2次会议，其中92名代表参加了本次会议。本次会议与去年召开的第一次会议的模式一样，都是在早上进行，并致力于3个主题，紧接着是来自于寻求相互合作机遇的其他组织12名代表的演讲。下午安排了这些组织的见面会，为推进他们之间的合作提供机会。; 金朵祁志军; 关键词：有害生物综合治理生物农药种植者农民生物资源

拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、鉴定及其特异性分析被引量：1: 2017年; 目的制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达。可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用FactorXa切除GST标签获得scFv,然后采用Western blotting法对其进行鉴定。scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析。结果经0.1mmol/LIPTG诱导后,重组菌BL21(DE3)-p ET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体。经鉴定,可溶性scFv相对分子量约为30k Da,效价为1:25600。同源半抗原Hap1对单链抗体sc Fv的IC50为2.43μg/mL,检出限为0.045μg/mL;scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性,IC50分别为3.29、4.72和5.55μg/mL。结论本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体,该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性,该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据。; 吴元元金朵付骋宇祁志军; 关键词：拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体

含有FYVE结构域的腺苷酸环化酶及其编码基因与应用: 本发明公开了一种来自大豆疫霉病菌(Phytophthora sojae)的含有FYVE结构域的腺苷酸环化酶及其编码基因与应用。本发明含有FYVE结构域的腺苷酸环化酶PsZFAC具有SEQ ID No.4所示的氨基酸序列，...; 刘西莉苗建强杜晓冉张晋辉金朵刘小飞高虎虎李文浩汝冰璐; 文献传递

含有FYVE结构域的腺苷酸环化酶及其编码基因与应用: 本发明公开了一种来自大豆疫霉病菌(Phytophthora sojae)的含有FYVE结构域的腺苷酸环化酶及其编码基因与应用。本发明含有FYVE结构域的腺苷酸环化酶PsZFAC具有SEQ ID No.4所示的氨基酸序列，...; 刘西莉苗建强杜晓冉张晋辉金朵刘小飞高虎虎李文浩汝冰璐

东方粘虫中肠V-ATP酶a亚基的克隆及原核表达: 2018年; 对东方粘虫[Mythimna separata(Walker)]中肠V-ATPase a亚基(MS-VATPa)cDNA全长序列进行克隆、原核表达及纯化研究。采用RT-PCR和RACE技术克隆MS-VATPa基因,再亚克隆于原核表达载体pET-22b(+)以构建重组载体pET22b-MS-VATPa,将鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,采用Ni-NTA柱亲和层析法纯化目标蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot验证。结果表明:成功克隆东方粘虫中肠MS-VATPa基因的cDNA全长序列,并实现MS-VATPa基因在大肠杆菌原核表达系统中的可溶性表达。; 金朵王高振吴元元吴元元吴文君; 关键词：东方粘虫原核表达

拟除虫菊酯类农药多残留酶联免疫分析方法的条件优化被引量：11: 2017年; [目的]优化拟除虫菊酯类农药多残留检测条件,建立适用于多种菊酯类农药的酶联免疫分析方法。[方法]优化多残留酶联免疫检测方法,建立半抗原对单链抗体的标准抑制曲线。对7种拟除虫菊酯类农药进行交叉反应,计算交叉反应率。[结果]最佳检测条件:包被抗原以质量浓度5 mg/L于37℃包被微孔2 h、单链抗体稀释640倍、稀释液中甲醇体积分数为10%、竞争时间为80 min、HRP/Anti-His酶标二抗稀释质量浓度为1/7000 g/L、显色20 min。该方法对氯菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯有较强交叉反应,交叉率分别为62.31%、43.43%、36.93%。[结论]成功建立可检测多种拟除虫菊酯类农药的酶联免疫分析方法,为免疫分析试剂盒的研发奠定基础。; 吴元元金朵付骋宇祁志军; 关键词：拟除虫菊酯半抗原多残留酶联免疫分析

东方粘虫U6启动子的克隆及功能验证被引量：1: 2017年; 为了持续获得大量短片段干扰RNA(short interference RNA,siRNA),通过染色体步移技术克隆得到东方粘虫U6snRNA基因5′-端侧翼启动子序列1 426bp。经生物信息学分析,该序列含SPH元件、八聚体序列(OCT)、远端序列元件(DSE)、近端序列元件(PSE)及TATA box等RNA聚合酶Ⅲ(RNA polymeraseⅢ,RNA PolⅢ)U6启动子的特征元件。通过构建RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体的方式,对增强型绿色荧光蛋白EGFP基因进行RNAi,证明克隆得到的东方粘虫U6启动子可成功驱动shEGFP表达,具有U6启动子功能。为后续构建以东方粘虫V-ATP酶H亚基为靶基因的沉默载体奠定基础。; 王高振金朵吴文君祁志军; 关键词：东方粘虫 RNA干扰

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金朵