李金生
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南昌大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- EGFR靶向shRNA真核表达载体的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建干扰表皮生长因子受体(EGFR)的pSilencerTM-EGFR表达质粒,转染入非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株,为观察对EGFR的沉默效应奠定基础。方法①根据人类EGFR的mRNA序列,设计4条干扰片段,以pSilencerTM2.1-U6-hygro质粒为载体,构建shRNA重组体,转化入DH5α大肠杆菌,提取质粒,进行酶切和测序鉴定;②采用脂质体2000分别转染人类非小细胞肺癌细胞株A549,用潮霉素(Hygromycin B)筛选阳性克隆。结果①经酶切及测序鉴定,成功构建了针对EGFR的4种重组干扰质粒,分别命名为pSilencerTM-EGFRⅠ、pSi-lencerTM-EGFRⅡ、pSilencerTM-EGFRⅢ和pSilencerTM-EGFRⅣ;②成功转染A549细胞,经筛选后得到稳定表达的细胞克隆。结论利用RNAi技术原理成功构建针对EGFR的shRNA重组质粒,并转染入A549细胞。
- 潘泽政杨小红贺慧为张晓春李金生
- 关键词：表皮生长因子受体RNA干扰转染
- 杂色曲霉菌变应原分离、鉴定及纯化
- 2011年
- 目的对杂色曲霉菌变应原蛋白进行分离、鉴定与纯化。方法提取杂色曲霉菌蛋白质,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,用免疫印迹(western-blot)鉴定变应原成分,用western-blot法鉴定出了6种变应原,通过离子交换和凝胶过滤层析纯化变应原。结果碳酸氢盐-盐水提取液(Coca’s液)共提取出23条蛋白质条带,分子量为17、20和62 kD的蛋白质为杂色曲霉菌主要变应原,而分子量为22、35和76kD的蛋白质为次要变应原;通过各种层析纯化变应原,得到含有分子量为20kD主要变应原和35kD的次要变应原的组分。结论鉴定了杂色曲霉菌的主要和次要变应原并部分纯化出其变应原组分,为变态反应疾病的诊断和治疗提供依据。
- 喻海琼周一平胡川李金生
- 关键词：变应原离子交换层析凝胶过滤层析
