张兵
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：扬州大学园艺与植物保护学院植物保护系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 亚洲玉米螟酚氧化酶原的原核表达和性质分析被引量：2
- 2014年
- 【目的】昆虫体内酚氧化酶原(PPO)是一种重要的天然免疫蛋白,参与昆虫的体液免疫和细胞免疫过程。本研究采用原核表达体系,大量表达可溶且具有活性的重组PPO蛋白,可用于各种酚氧化酶(PO)抑制剂的筛选,从而为创制抑制昆虫免疫系统的新型杀虫剂提供条件。【方法】利用从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis 5龄幼虫体内克隆获得PPO基因,构建了pET-28b-PPO原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli中重组表达了亚洲玉米螟PPO蛋白;采用Ni-NAT亲和层析柱快速纯化目的蛋白,进行了Western杂交鉴定;测定分析了重组PPO蛋白激活为PO后的酶学性质以及不同金属离子(Mg2+,Cu2+和Fe2+)对PPO二级结构的影响。【结果】融合蛋白PPO得到了表达和纯化。重组PPO蛋白激活为PO后最适反应温度为30℃,最适pH为7.2,以L-DOPA为底物时PO催化反应的Vmax为140.8 U/mg·min,Km为2.96 mmol/L。Fe2+存在的情况下重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著增加至53.7%±4.6%,α-螺旋结构成分则显著下降至2.6%±1.2%(P<0.05);有Mg2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降,α-螺旋结构成分稍有上升。有Cu2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降为10.0%±1.6%,而α-螺旋结构成分则上升至35.3%±6.9%。【结论】结果说明不同金属离子对重组PPO蛋白的二级结构有显著影响。
- 赵同伟张兵吕文静翟会锋吴桃燕张石洋汤小伟冯从经
- 关键词：亚洲玉米螟酚氧化酶原原核表达蛋白纯化酚氧化酶
- 斜纹夜蛾畸形蛹蛋白质的双向电泳分析
- 2013年
- 为探索斜纹夜蛾蛹畸形发育的生理机制,在室内将斜纹夜蛾幼虫饲养至蛹期,测定了斜纹夜蛾蛹的生物学参数,并采用双向电泳技术对蛹整体可溶蛋白质进行分析。结果表明:畸形蛹率达(18.8±1.2)%,其畸形蛹的发育历期明显短于正常蛹,为(9.5±0.7)d(P<0.01)。畸形蛹中雌蛹和雄蛹的体重也明显小于正常蛹(P<0.01)。在正常蛹中共检测到约147个蛋白质点,主要集中在分子量1.1×104至7.6×104、等电点3.23至9.80之间。在畸形蛹中共检测到149个蛋白质点,主要集中在分子量1.0×104至7.7×104、等电点3.61至9.61之间。在正常蛹中有45个特异表达蛋白质点,畸形蛹中有47个特异表达蛋白质点。
- 苗俊玲杨俊明张兵郭晓丽吴桃燕赵同伟冯从经
- 关键词：斜纹夜蛾双向电泳
