卢彪
- 作品数：9 被引量：37H指数：4
- 供职机构：贵州大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵阳市科学技术计划项目贵州省科技厅重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学环境科学与工程轻工技术与工程更多>>
- 枯草芽孢杆菌基因的安全改良研究被引量：1
- 2014年
- 为了构建能稳定表达外源基因且无抗性标记基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分两段扩增定位于B.subtilis BJ3-2染色体上的谷氨酰胺酶基因(glsA)上下游基因片段作为同源臂。将同源臂及卡那霉素基因(Kan)克隆入温敏型载体pKSV7,构建了双交换载体pKUKD。并利用pKUKD质粒将kan基因定点整合入BJ3-2染色体上,通过Kan抗性筛选获得glsA敲除菌株BJ-kan。经检测BJ3-2菌株谷氨酰胺酶活力比重组菌株高3.2倍。结果显示:BJ3-2染色体上的基因可通过同源重组方式进行敲除与置换,为今后BJ3-2菌株以及野生型B.subtilis基因敲除与置换提供了更加便捷的方法。
- 沈玺龙蔡传斌王亚娟卢彪吴拥军
- 关键词：枯草芽孢杆菌谷氨酰胺酶卡那霉素
- 枯草芽孢杆菌BJ3-2精氨酸脱羧酶基因speA的克隆与序列分析被引量：4
- 2014年
- 根据GenBank中枯草芽孢杆菌168菌株的精氨酸脱羧酶基因speA序列设计特异性引物,提取Bacillus subtilis BJ3-2基因组DNA进行PCR扩增,并克隆至pGEM-T载体后测序。序列分析结果表明,Bacillus subtilis BJ3-2 speA基因ORF长为1 473 bp,可编码490个氨基酸,分子质量为53.53ku,基因登录号为KJ561348,与已报道枯草芽孢杆菌的speA基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性均达93%以上,精氨酸脱羧酶氨基酸序列系统进化树分析,发现Bacillus subtilis BJ3-2的ADC与Bacillus subtilis 168亲缘关系最近,属于典型的III型PLP依赖型鸟氨酸/赖氨酸/精氨酸脱羧酶家族成员。speA基因序列分析及其蛋白保守结构域的分析,为有效控制水豆豉产品中生物胺含量的研究提供了理论依据。
- 刘艳敏卢彪沈玺龙王涛吴拥军
- 关键词：枯草芽孢杆菌基因克隆
- 餐厨垃圾自然升温堆肥工艺研究被引量：10
- 2013年
- 为研究餐厨垃圾发酵生产有机肥的可行性,优化堆肥发酵工艺,对堆体C/N、辅料、翻堆频率、粒径和pH值等可变因素进行了堆肥研究,结果表明,餐厨垃圾堆肥发酵的最佳条件为:C/N 20～27,以粒径<5 mm的稻草为辅料,含水率(65±5)%,翻堆频率1次/d(以保持堆体温度不超过70℃),一个堆肥周期内翻堆15～20次,堆肥周期为20 d左右。产品理化指标检测符合有机肥料标准(NY525-2002),且堆肥工艺重复性好,生产成本低,具有较高的应用价值。
- 郭倩倩吴拥军韩丽珍王嫱薛伟卢彪
- 关键词：N辅料含水率
- 高活性谷氨酰胺酶豆豉芽孢杆菌的筛选及glsA基因的克隆被引量：7
- 2011年
- 为筛选获得高活性谷氨酰胺酶豆豉芽孢杆菌菌株,提高谷氨酸的含量,试验通过康维皿弥散法对525株芽孢杆菌进行酶活检测,获得一株产谷氨酰胺酶活力为68.407 mg NH3/(g曲.h.37℃)的B.subtilisGA317菌株,其酶活力较B.subtilisBJ3-2高5.59倍。对2个菌株谷氨酰胺酶编码基因glsA进行克隆测序,结果表明:2个菌株glsA基因核酸序列和蛋白序列同源性分别为63%和47%,表现出较大的差异。B.subtilisGA317与B.subtilisBJ3-2蛋白序列中都含有α3,α6,β8 3个酶活性位点,分别位于蛋白序列中67-80、117-125、260-267的3个区域,B.subtilisG317的α3区域有7个氨基酸发生改变,在α6和β8区域各有1个氨基酸发生改变。研究为进一步利用基因工程技术改良菌种产谷氨酰胺酶活力奠定了一定基础。
- 詹寿年吴拥军郭倩倩卢彪
- 关键词：谷氨酰胺酶枯草芽孢杆菌
- 谷氨酰胺酶基因原核表达载体的构建与表达被引量：2
- 2013年
- 为验证谷氨酰胺酶基因glsA2的酶活力,以pET-32a为表达载体构建原核表达重组质粒pET32a-glsA2,转化表达菌株E.coli BL21(DE3)。从异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度及诱导表达时间两方面对重组菌株glsA2基因的表达系统进行优化。结果显示,0.1mmol/L IPTG诱导6h,谷氨酰胺酶活力达到608.2U/μg,约为对照的15倍。
- 卢彪吴拥军吴玉俊罗熹刘艳敏
- 关键词：谷氨酰胺酶原核表达
- 高活性谷氨酰胺酶基因glsA_2在枯草芽孢杆菌BJ3-2染色体上的定点整合被引量：2
- 2014年
- 以枯草芽孢杆菌BJ3-2的glsA1基因为同源序列,通过构建单交换整合载体,将高活性谷氨酰胺酶基因glsA2定点整合入BJ3-2菌株染色体中,获得能够稳定遗传的重组菌株BJ3-2A2。经检测重组菌株谷氨酰胺酶活力为BJ3-2菌株的3.36倍。利用重组菌株BJ3-2A2发酵豆豉,全氨基酸检测显示,重组菌株发酵的豆豉谷氨酸含量比出发菌株高12.8%。说明枯草芽孢杆菌BJ3-2可以转化且为RecE+菌株,glsA2基因在BJ3-2菌株染色体上可实现较高活性表达,并提高发酵豆豉的鲜味。
- 卢彪吴拥军刘艳敏王亚娟唐雪
- 关键词：枯草芽孢杆菌同源重组
- 贵州省加工型辣椒资源RSAP分析被引量：8
- 2012年
- 利用RSAP标记技术对贵州省的20份加工型辣椒种质资源进行评价,以期为辣椒品种选育提供依据。结果表明,3对引物共扩增出72条带,其中47条为多态性条带,多态性比例为65.3%,平均每对引物产生24条多态性条带,片段大小为100～2 000bp。聚类分析结果表明,20份材料的遗传相似系数变化范围为0.625～0.931,果形性状在聚类图中呈随机分布,表明贵州省加工型辣椒种质间存在着丰富的遗传多样性。
- 左泽彦吴拥军罗熹吴玉俊卢彪
- 关键词：加工型辣椒种质资源聚类分析
- 餐厨垃圾堆肥发酵菌株筛选被引量：3
- 2012年
- 为提高HM菌剂对餐厨垃圾堆肥的发酵效果,以国内主要商品菌剂为材料,筛选出三株适用于堆肥发酵的菌株:产淀粉酶D6(Bacillus Cohn,1872)、产脂肪酶Z4(Bacillus Cohn,1872)、产纤维素酶X4(Brevibacillus shida,1996)。结果表明:D6体外淀粉酶活达26.48 U/mL,Z4体外淀粉酶活达6.67 U/mL,X4体外淀粉酶活达4.05 U/mL,且菌株之间及菌株与HM菌剂之间拮抗作用不明显。混合菌剂以D6∶Z4∶X4=1∶1∶1时产酶效果最好,淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶分别达到12.00 U/mL、1.83 U/mL和76.93 U/mL。与HM复合菌剂混合堆肥效果优于HM菌剂单独堆肥。
- 郭倩倩吴拥军卢彪韩丽珍
- 关键词：餐厨垃圾淀粉酶脂肪酶纤维素酶
- 植物体瞬时表达ChIFN-γ蛋白研究被引量：3
- 2013年
- 以生菜、洋葱、萝卜为试材,用转入植物表达载体pSH-NGN的根癌农杆菌EHA105分别采用真空渗透法和直接注射法瞬时表达ChIFN-γ蛋白,研究其最佳宿主植物和最佳方法。结果显示,真空渗透法和直接注射法在瞬时表达效率上差异不大,真空渗透操作上更简便、更易掌握;新鲜市售生菜,真空抽气25 min,共培养3 d,瞬时表达效率达到3 645 pg/g,ChIFN-γ蛋白得到高效表达。
- 罗熹王涛卢彪
- 关键词：农杆菌转化ELISA
