陈万里
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 长链非编码RNA NEAT1与猪繁殖与呼吸综合征病毒互作机制的初步研究
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是世界养猪行业中最具经济毁灭性的疾病之一,它于1980年同时出现在北美和欧洲,其元凶是猪繁殖与呼吸...
- 陈万里王衡
- 文献传递
- PRRSV抗体的荧光微球免疫学检测方法的建立
- 建立一种高通量、重复性好、特异性高的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的快速检测方法,用纯化后的PRRSV非结构蛋白7(Nsp7)重组蛋白作为偶联抗原建立PRRSV抗体荧光微球免疫学检测方法.本研究建立的荧光微球免...
- 曾梦记方晓冀池海陈万里张桂红王衡
- 关键词：蛋白序列
- PRRSV抗体的荧光微球免疫学检测方法的建立
- ＜正＞研究目的:为了建立一种高通量、重复性好、特异性高的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的快速检测方法,用纯化后的PRRSV非结构蛋白7（Nsp7）重组蛋白作为偶联抗原建立PRRSV抗体荧光微球免疫学检测方法。材...
- 曾梦记方晓冀池海陈万里张桂红王衡
- 实时荧光定量PCR所用仔猪组织内参基因的筛选被引量：2
- 2019年
- 为了保证在应用实时荧光定量PCR方法检测仔猪目的基因时,检测结果可以科学地用于多组织间的纵向比较,减少因内参基因在多组织间变化而带来的误差,筛选出能够在多组织间稳定表达的内参基因,对于目标基因的准确校正具有重要意义。本试验以4周龄仔猪不同组织(心、肝、脾、肺、肾、胰、气管、骨骼肌、肺门淋巴结、大肠、小肠、大脑、小脑)为试验样本,利用qPCR方法分别检测3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、泛素辍合酶(UBC)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白L3(RPL3)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶1(HPRT1)、羟甲基胆素合成酶(HSBM)等7个基因在各组织内的m RNA表达稳定情况。经LinReg PCR和geNorm软件统计分析,结果表明,上述看家基因在所选的13种组织中表达稳定性依次为RPL3>RPL32>UBC>HSBM>HPRT1>GAPDH>LDHA。综上所述,RPL3基因在13种组织中的相对稳定性最高。
- 宋如月王京煜陈万里冀池海曾宇晨潘昊鸣王衡
- 关键词：GENORM内参基因实时荧光定量PCR仔猪
- 长链非编码RNA NEAT1通过Wnt/β-catenin信号通路影响PRRSV复制机制的初步研究被引量：2
- 2021年
- 长链非编码RNA(LncRNA)是一种长度大于200 nt的非编码RNA分子,对于调节多种生命活动发挥着重要作用。为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与LncRNA核富集转录体1(NEAT1)相互作用的分子基础,本研究将PRRSV(MOI 1)感染Marc-145细胞,分别在感染后不同时间(0、1 h、2 h、3 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h、48 h、60 h、72 h)收集细胞,提取细胞总RNA,反转录为cDNA,利用qRT-PCR方法检测PRRSV对Marc-145细胞内NEAT1转录的影响,结果显示:PRRSV感染显著上调Marc-145细胞内NEAT1的转录水平(p<0.001);将不同MOI(0.1、0.5、1、2)PRRSV感染Marc-145细胞48 h后收集细胞总RNA,利用qRT-PCR方法检测PRRSV对Marc-145细胞内NEAT1转录的影响,结果显示,不同MOI的PRRSV对NEAT1的转录水平影响不显著;将PRRSV(MOI 1)感染Marc-145细胞48 h后,采用RNA荧光原位杂交(RNAscope)方法检测PRRSV感染对NEAT1在Marc-145细胞内分布的影响,结果显示,NEAT1定位于Marc-145细胞核,PRRSV感染诱导核内NEAT1的转录水平上调(p<0.01);将NEAT1-C0、C1、C2、C3、C4、C5和C6分别转染Marc-145细胞12 h后,接种PRRSV(MOI 0.1)24 h,采用q RT-PCR方法检测NEAT1各个片段对PRRSV复制的影响,结果显示,NEAT1各个片段过表达均可抑制PRRSV ORF7 mRNA的转录,其中C4区域的抑制效果最佳(p<0.001);将NEAT1-C4转染Marc-145细胞36 h,采用q RT-PCR方法检测NEAT1-C4对细胞因子分泌的影响,结果显示,过表达NEAT1-C4上调Marc-145细胞内IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10、细胞性骨髓瘤病病毒癌基因(c-myc)和细胞周期蛋白1(cyclinD1)的转录水平(p<0.001);将TOP、NEAT1-C4和PGL4.74共转染Marc-145细胞36 h,同时将FOP、C4和PGL4.74共转染Marc-145细胞作为对照,利用双荧光素酶报告基因方法检测NEAT1-C4对Wnt/β-catenin通路活性的影响,结果显示,过表达NEAT1-C4显著增加LEF1/TCF转录因子的转录活性(p<0.01),及诱导Wnt/β-catenin通路的活化。上述结果首次证实了LncRNA NEAT1通过C4段区域上调
- 王京煜陈万里龚浪潘昊鸣曾宇晨梁杏玲马俊张桂红王衡
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒复制WNT/Β-CATENIN信号通路
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的荧光微球免疫学检测方法的建立被引量：6
- 2017年
- 为了建立一种高通量、重复性好、特异性高的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的快速检测方法,本研究用纯化后的PRRSV非结构蛋白7(Nsp7)重组蛋白作为偶联抗原建立PRRSV抗体的荧光微球免疫学检测方法。对检测方法进行分析结果表明,批内、批间变异系数分别为3.2%、4.2%,与其他常见猪病阳性血清无交叉反应。当单抗浓度低至1 ng/mL时,该方法仍具有高灵敏度。本研究建立的荧光微球免疫学检测方法能快速检测临床样本PRRSV抗体,为PRRSV检测提供了一种新方法。
- 曾梦纪方晓冀池海陈万里陈万里王衡
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达
- 犬MG53基因的克隆与表达
- 2017年
- 为进一步研究犬MG53在机体内的分布情况及其生物活性,本研究设计特异性引物进行犬MG53目的基因的克隆,并将其连接至p MAL-C5X表达载体中,利用大肠杆菌表达系统进行表达。结果显示,克隆得到由1 435个核苷酸构成的犬MG53基因;获得MG53蛋白与麦芽糖结合蛋白标签(MBP)融合表达的可溶性重组蛋白,大小约为95 ku。通过结构及生物学功能预测发现,该蛋白易降解,具有RING、B-Box、Coiledcoil及SPRY-PRY四个功能结构域,并分布有半胱胺(Cysteamine)、2-氨基乙硫醇(2-Amino-1-Ethanethiol)、硫代乙醇胺(Thioethanolamine)、2,3-Deshydrolanthionine、Zn2+及Mg2+等分子结合位点,具有蛋白结合能力。上述结果表明,犬MG53与人、家兔、小鼠、大鼠MG53的结构相似,并可能具有参与泛素化、骨骼肌细胞修复等重要的生物学功能。
- 温圣文贾坤陈万里曾梦李守军王衡
- 关键词：克隆生物学功能
