邓小芳
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：重庆市北碚区中医院更多>>
- 发文基金：辽宁省科技厅基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ALEX1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的：探讨构建Arm重复蛋白1（ALEX1）基因过表达慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞系SK-BR3后观察ALEX1的表达,为研究ALEX1在乳腺癌中的作用及机制奠定基础。方法：利用DNA重组技术将ALEX1基因插入到慢病毒穿梭质粒LV5中,获得重组慢病毒质粒V-ALEX1,经酶切鉴定及DNA测序鉴定后,用Lipofectamine 2000将重组质粒和慢病毒包装质粒系统（p Gag/Pol、pRev、p VSV-G）转染293T细胞中包装成重组慢病毒颗粒,经流式细胞术测定重组慢病毒滴度。将成功包装的ALEX1过表达慢病毒载体（LV5-ALEX1）和阴性对照载体（LV5-NC）,感染SK-BR3细胞（MOI为10）48~72 h,Realtime PCR和Western blot法分析ALEX1表达情况。结果：酶切鉴定结果显示：产生约1 500 bp的片段,片段大小与ALEX1基因cDNA大小一致。DNA测序比对说明测序结果与预期ALEX1基因序列完全一致,证实ALEX1基因正确插入载体中,成功构建ALEX1基因过表达载体。经293T细胞包装后,成功获得病毒滴度为4.25×10~8TU/ml的重组慢病毒LV5-ALEX1。Realtime PCR和western blot结果显示：与感染LV5-NC的SK-BR3细胞相比,LV5-ALEX1感染可明显增加ALEX1 mRNA及蛋白的表达水平。结论：成功构建ALEX1基因过表达慢病毒载体,ALEX1基因过表达慢病毒能够感染乳腺癌SK-BR3细胞,可使外源基因获得稳定过表达。
- 高月邓小芳雷继魁
- 关键词：慢病毒
