- 大黄素对糖尿病小鼠肾积水的保护作用被引量：1
- 2021年
- 目的观察大黄素对糖尿病小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)导致肾积水的保护作用。方法选择健康C57BL/6J小鼠15只随机分为3组,糖尿病小鼠+假手术(A组),糖尿病小鼠+UUO(B组),糖尿病小鼠+UUO+大黄素(C组),每组5只。各组予以干预后,血清检测肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学变化;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡水平;免疫组织化学法和蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)在肾脏中的表达。组间比较采用t检验。结果A组和C组Cr及BUN指标低于B组(10.811±2.136、8.506±1.424、16.902±0.575、14.834±0.912比19.366±1.614、17.762±1.290,t=7.146、10.770、3.216、4.145,P<0.05)。A组和C组SOD指标高于B组(185.322±5.128、158.130±7.963比128.696±9.610,t=11.624、5.274,P<0.05)。A组和C组MDA指标低于B组(10.388±0.713、15.676±1.408比22.648±1.538,t=16.254、7.502,P<0.05)。HE染色显示A组肾脏结构基本正常,B组肾脏结构明显损害,C组肾脏损伤程度减轻。A、B、C组凋亡指数分别为(9.220±0.829)%、(19.600±1.819)%、(15.520±0.973)%,各组差异具有统计学意义。免疫组织化学法结果显示,与A组比较,B组Caspase-3及bax表达增加、bcl-2表达下降,C组相比于B组Caspase-3及bax表达下降、bcl-2表达增高。Western blot结果显示,A组和C组Caspase-3及bax指标低于B组(0.734±0.091、0.736±0.069、1.154±0.093、1.323±0.079比1.647±0.123、1.986±0.202,t=13.345、13.075、7.138、6.824,P<0.05),A组和C组bcl-2指标高于B组(1.766±0.234、1.282±0.138比0.736±0.097,t=9.086、7.234,P<0.05)。结论大黄素能通过抗氧化应激、抗凋亡作用,改善糖尿病小鼠单侧输尿管梗阻导致的肾损伤。
- 刘聪戚宇诚赵胜韩尚廷宁金卓程帆
- 关键词：大黄素糖尿病单侧输尿管梗阻氧化应激凋亡
- 时钟基因芳烃受体核转位因子样蛋白1通过调控沉默信息调节因子1抑制转化生长因子-β1/Smad蛋白2通路减轻肾小管上皮细胞缺氧/复氧后纤维化的研究
- 2021年
- 目的探讨时钟基因芳烃受体核转位因子样蛋白1(Bmal1)调控沉默信息调节因子1(SIRT1)通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白2(Smad2)通路在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧后纤维化中的作用。方法将HK-2细胞随机分组:正常对照组(A组)、缺氧/复氧组(B组);siCTRL组(C组)、siBmal1组(D组)、HR +siCTRL组(E组)、HR+ siBmal1组(F组);HR + siCTRL +二甲基亚砜(DMSO)组(G组)、HR+ siCTRL+白藜芦醇(Resveratrol)组(H组)、HR+ siBmal1 +DMSO组(I组)、HR+ siBmal1 + Resveratrol组(J组),用小干扰RNA(siRNA)敲低Bmal1,各组给予相应干预措施,蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞Bmal1、SIRT1、TGF-β1、Smad2、磷酸化Smad蛋白2(p-Smad2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、锌指转录因子1(snail1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达量。使用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析。结果 B组Bmal1、SIRT1指标低于A组(0.310±0.039、0.248±0.037比0.668±0.161、0.416±0.049,t=3.046、3.873,P<0.05),而B组TGF-β1、p-Smad2指标高于A组(0.734±0.022、0.563±0.07比0.280±0.102、0.190±0.021,t=6.115、7.062,P<0.05);D、E组Bmal1、SIRT1指标低于C组(0.547±0.031、0.647±0.029比0.754±0.036,0.311±0.024、0.339±0.017比0.450±0.032,t=6.335、3.289、5.861、4.688,P<0.05),D、E组TGF-β1、p-Smad2指标高于C组(0.314±0.011、0.379±0.007比0.072±0.009,0.399±0.015、0.313±0.025比0.240±0.013,t=15.910、20.150、7.736、3.553,P<0.05);F组Bmal1、SIRT1指标低于D、E组(0.199±0.033比0.547±0.031、0.647±0.029,0.158±0.016比0.311±0.024、0.339±0.017,t=10.950、14.000、6.433、7.606,P<0.05),F组TGF-β1、p-Smad2指标高于D、E组(0.443±0.026比0.314±0.011、0.379±0.007,0.488±0.026比0.399±0.015、0.313±0.025,t=8.472、4.233、4.304、8.488,P<0.05);H组Bmal1、SIRT1指标高于G组(0.964±0.026、0.444±0.031比0.629±0.036、0.339±0.019,t=11.830、4.829,P<0.05),而H组TGF-β1、p-Smad2指标低于G组(0.235±0.022、0.213±0
- 黄欣李维程帆余伟民饶婷阮远袁润宁金卓叶芃赵胜
- 关键词：肾脏缺血再灌注损伤纤维化时钟基因
- 芳香烃受体核转录蛋白样1通过抑制细胞外调节蛋白激酶磷酸化改善肾纤维化
- 2022年
- 目的探讨芳香烃受体核转录蛋白样1(BMAL1)对肾纤维化的影响及机制。方法将HK-2细胞简单随机分组:对照组(A组)、转化生长因子-β1(TGF-β1)-5 ng/ml组(B组)、TGF-β1-10 ng/ml组(C组)、TGF-β1+si-BMAL1组(D组)、TGF-β1+BMAL1-OE组(E组)、TGF-β1+si-BMAL1+PD98059组(F组), 各组给予相应的干预措施, 用蛋白质印迹法(Western blot)检测BMAL1、纤维连接蛋白(Fibronectin)、Ⅰ型胶原纤维蛋白(COL-Ⅰ)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的表达量。将24只SD雄性大鼠简单随机分组:假手术组(G组)、UUO-3 d组(H组)、UUO-7 d组(I组)、UUO-7 d+sh-BMAL1组(J组), 各组给予相应干预措施, 用马松(Masson)染色观察肾间质胶原纤维表达, 用Western blot检测BMAL1、Fibronectin、COL-Ⅰ、E-cadherin、ERK、p-ERK蛋白的表达量。两组间比较采用t检验。结果随着TGF-β1的浓度增加, HK-2细胞BMAL1、Fibronectin、COL-Ⅰ表达量逐渐升高;随着UUO时间延长, 大鼠的BMAL1、Fibronectin、COL-Ⅰ表达量、Masson染色肾间质蓝色胶原纤维面积比值逐渐升高;D组的Fibronectin、COL-Ⅰ、p-ERK表达量高于C组(4.94±0.74、3.46±0.28、3.18±0.48比3.14±0.52、2.42±0.20、2.05±0.31, t=3.455、5.269、3.400, P<0.05), BMAL1、E-cadherin表达量低于C组(0.28±0.11、0.25±0.10比2.69±0.27、0.58±0.08, t=-14.179、-4.586, P<0.05);E组的Fibronectin、COL-Ⅰ、p-ERK表达量低于C组(1.76±0.21、1.69±0.12、1.52±0.11比3.14±0.52、2.42±0.20、2.05±0.31, t=-4.032、-5.375、-2.788, P<0.05), BMAL1、E-cadherin表达量高于C组(3.80±0.36、0.79±0.05比2.69±0.27、0.58±0.08, t=4.244、3.875, P<0.05);J组的Fibronectin、COL-Ⅰ、p-ERK表达量高于I组(16.48±1.42、3.68±0.31、2.36±0.44比8.93±2.35、2.65±0.31、1.55±0.14, t=6.258、5.141、4.440, P<0.05), BMAL1、E-cadherin表达量低于I组(0.51±0.21、0.22±0.07比5.26±0.48、0.55±0.09, t=-19.928、-6.841, P<0.05);F组Fibronectin、
- 祝军陈伍赵胜宁金卓饶婷余伟民程帆
- 关键词：细胞外调节蛋白激酶肾纤维化
- 糖尿病肾脏病的发病机制研究进展被引量：12
- 2020年
- 糖尿病肾脏病(DKD)作为糖尿病最主要的微血管并发症之一,已成为终末期肾病的主要病因,严重影响患者的生存及预后。DKD可通过多种途径损害肾脏,肾脏血管、肾小球和肾小管均可在疾病进展过程中受累,其发病机制较复杂,确切机制尚未明确。遗传因素、血流动力学效应、炎症反应、代谢紊乱、氧化应激和肾小球的病理改变及细胞损伤等多种因素可能共同参与DKD的发病。对DKD发病机制的进一步研究对DKD的临床治疗具有重要意义。
- 陈伍赵胜周向军程帆
- 关键词：糖尿病肾脏病血流动力学效应炎症反应代谢紊乱氧化应激
- 时钟基因Bmal1调控过氧化物酶体增殖物激活受体α/氧化物酶体增殖物活化受体协同刺激因子1α通路减轻移植肾缺血再灌注损伤的研究被引量：3
- 2019年
- 目的探讨时钟基因Bmal1调控过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)/氧化物酶体增殖物活化受体协同刺激因子1α(PGC-1α)通路对移植肾(TK)缺血再灌注损伤(IRI)的作用。方法体内实验验证Bmal13条短发卡RNA(shRNA)序列敲低Bmal1的效果,选取干预效果最好的第二条序列用于后续实验。将24只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组,TK组,TK+Bmal1 shRNA组,TK+Bmal1 shRNA+Fenofibrate(PPARα激动剂)组。各组给予相应的干预,血清检测肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测肾组织Bmal1、PPARα、PGC-1α、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)/bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达量;比色法检测肾组织三磷酸腺苷(ATP)生成量。使用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果与假手术组(73.5±6.7、8.2±0.7、2.16±0.20、3.15±0.29、6.28±0.42、2.09±0.22、29.33±3.14)比较,TK组血清Cr(211±17.4)、BUN(44±3.8)含量及肾组织损伤程度均增加(t=18.063、22.695,P<0.05),而肾组织Bmal1(1.63±0.17)、PPARα(2.52±0.20)、PGC-1α(4.65±0.37)、bcl-2/bax(1.22±0.14)及ATP(15.34±1.02)生成量降低(t=4.946、4.450、7.133、8.172、10.380,P<0.05);与TK组比较,TK+Bmal1 shRNA组血清Cr(307.0±28.9)、BUN(53.0±4.2)含量及肾组织损伤程度均增加(t=6.971、3.892,P<0.05),而肾组织Bmal1(1.30±0.11)、PPARα(2.01±0.23)、PGC-1α(3.86±0.20)、bcl-2/bax(0.76±0.06)及ATP(10.15±0.96)生成量进一步降低(t=3.992、4.099、4.601、7.398、9.076,P<0.05);与TK+Bmal1 shRNA组比较,TK+Bmal1 shRNA+Fenofibrate组血清Cr(241.3±20.2)、BUN(47.0±4.5)含量及肾组织损伤程度均降低(t=4.564、2.388,P<0.05),而肾组织Bmal1(1.55±0.10)、PPARα(2.48±0.17)、PGC-1α(4.36±0.25)、bcl-2/bax(1.10±0.11)及ATP(14.71±1.21)生成量增加(t=4.119、4.025、3.826、6.647、29.572,P<0.05)。结论时钟基因Bmal1可通过活化PPARα/PGC-1α通路减轻移植肾缺血再灌注损伤。
- 李维夏中元李文远熊永红冷燕赵胜程帆
- 关键词：BMAL1
- 组蛋白甲基转移酶和去甲基化酶在膀胱癌发生发展中的作用研究进展被引量：1
- 2022年
- 膀胱癌发病机制复杂,同时又是基因突变最频繁的人类癌症之一。近年研究表明,表观遗传学调控在膀胱癌的发生发展中具有重要作用,与组蛋白甲基化修饰相关的组蛋白甲基转移酶和组蛋白去甲基化酶是其中重要的环节。组蛋白甲基转移酶和组蛋白去甲基化酶的高频突变及异常表达改变了核小体的原子结构,导致细胞基因表达模式发生变化,通过促进或抑制各种效应蛋白募集,调控广泛的上下游信号通路促进上皮间充质转化,赋予干细胞表型和影响肿瘤免疫等,对膀胱癌的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为产生影响,直接参与膀胱癌的发生发展过程。
- 邢基朱少明赵胜林方优程帆
- 关键词：膀胱癌表观遗传学组蛋白甲基化组蛋白甲基转移酶组蛋白去甲基化酶
- 气腹压对不同程度积水肾的损伤作用
- 2017年
- 目的:研究不同大小的气腹压力对于不同程度的积水肾的损伤作用。方法:采用输尿管套扎法建立左侧轻、重度肾积水模型,54只新西兰大白兔随机分为三组:假手术组(N组,n=18),轻度积水组(M组,n=18),重度积水组(S组,n=18),每组再分为三个亚组,依次给予0,10,15mmHg气腹加压处理1h。术后48h取左侧肾脏,HE染色观察肾小管形态结构,测肾组织内活性氧(ROS),丙二醛(MDA),乳酸(LD)含量,TUNEL检测细胞凋亡,取血清检测血肌酐(Cr),尿素氮(BUN)。结果:对于假手术组和轻度积水组,当压力为15mmHg时,肾损伤明显加重(肾小管结构明显改变,凋亡指数明显增加,ROS,MDA,LD含量明显升高);对于重度积水组,当压力为10mmHg时,肾脏损伤即明显加重。各小组Cr及BUN的差异无统计学意义。结论:重度积水的肾脏更容易受到气腹压造成的进一步损伤,行腹腔镜手术时应适当控制气腹压的大小。
- 赵胜程帆李维饶婷阮远刘路袁润姚小兵
- 关键词：肾积水二氧化碳气腹压
- 精索静脉曲张大鼠睾丸细胞自噬的初步研究被引量：8
- 2017年
- 目的初步研究自噬在精索静脉曲张大鼠模型中的表达改变和可能的理论意义,及初步探讨自噬和凋亡的可能关系,为精索静脉曲张致不育机制的研究提供新的方向。方法取SD雄性大鼠40只,分为正常对照组、VC组(VC造模组)、VC手术组(VC+手术治疗组)、假手术组,每组10只。正常对照组不做任何处理,VC组和VC手术组行造模,假手术组打开腹腔但不做任何处理,第30天时对VC手术组行左侧精索静脉高位结扎手术治疗。第60天时对所有组大鼠行左侧睾丸切除术。对睾丸组织行HE染色、TUNEL染色,透射电镜观察用于睾丸生精小管上皮细胞自噬体;Western-blot、RT-PCR检测LC3-Ⅱ和Beclin1含量变化。结果透射电镜观察正常对照组和假手术组生精小管上皮细胞中较少见自噬体和自噬溶酶体,VC组和VC手术组中自噬体、自噬溶酶体明显增多。Western-blot及RT-PCR检测示,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ在VC组和VC手术组中表达明显高于正常对照组和假手术组。结论 VC可致大鼠睾丸生精小管上皮细胞中自噬体表达增多的现象,并且初步探讨自噬与凋亡呈正相关的关系。对VC睾丸细胞自噬的研究,可能进一步为VC的临床治疗提供新的靶点和理论依据。
- 朱少明余伟民饶婷阮远李浩勇杨潇宁金卓袁润赵胜程帆
- 关键词：自噬精索静脉曲张透射电镜
- 微小RNA-325对肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤后凋亡的影响
- 2021年
- 目的探讨微小RNA-325(miRNA-325)在肾小管上皮细胞缺氧复氧(H/R)损伤模型中的作用及其机制。方法选取人肾小管上皮细胞HK-2,建立适当的肾小管上皮细胞H/R模型(缺氧24 h复氧2 h)。将HK-2细胞分为对照组、H/R组、H/R+抑制剂(inhibitor)组和H/R+抑制剂阴性对照(inNC),转染miRNA-325 inhibitor和inNC后进行缺氧复氧处理,然后进行后续实验。用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测HK2细胞在H/R后活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)等的表达水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HK2细胞中miRNA-325、Caspase-3和XIAP mRNA表达水平。使用双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-325与XIAP 3’端非编码区(3’UTR)之间的关系。组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果H/R组细胞凋亡率高于对照组[(12.11±1.65)%比(3.88±0.24)%,t=8.311,P<0.05];H/R+Inhibitor组细胞凋亡率低于H/R组[(7.60±3.07)%比(12.11±1.65)%,t=4.557,P<0.05]。Western blot结果显示,实验组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)、(0.63±0.01)、(0.61±0.02)比(0.41±0.01),F=212.095,P<0.05]和bax[(0.53±0.02)、(0.63±0.01)、(0.64±0.04)比(0.41±0.02),F=105.138,P<0.05]蛋白表达量显著高于对照组,bcl-2[(0.57±0.02)、(0.52±0.02)、(0.49±0.01)比(0.62±0.02),F=89.498,P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)、(0.24±0.03)、(0.24±0.01)比(0.33±0.03),F=27.575,P<0.05]表达量显著低于对照组;H/R+Inhibitor组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)比(0.61±0.02),t=11.437,P<0.05]和bax[(0.53±0.02)比(0.64±0.04),t=7.253,P<0.05]的表达低于H/R组,bcl-2[(0.57±0.02)比(0.49±0.01),t=9.471,P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)比(0.24±0.01),t=4.231,P<0.05]的表达量高于H/R组,差异均有统计学意义。qRT-PCR结果显示,实验组miRNA-325[(7.27±0.30)、(4.66±0.21)、(7.11±0.25)比(1.05±0.13),F=1453.045
- 张左赵胜周向军宁金卓余伟民程帆
- 关键词：微小RNA凋亡缺氧复氧
- 外泌体在草酸钙晶体所致肾间质纤维化中的作用
- 2021年
- 目的探讨外泌体在草酸钙晶体所致肾损伤及肾间质纤维化中的作用。方法C57小鼠30只(6~8周龄,体重24~26 g),其中24只野生型(WT)小鼠,6只纯合子Rab27a-/-(KO)小鼠。WT小鼠随机分为空白对照(NC)组、造模1周组、造模2周组、造模4周组(WT造模组),Rab27a-/-小鼠为KO造模组,每组6只,1.25%乙二醇灌胃,分别持续给药0、1、2、4及4周,构建肾结石小鼠动物模型。苏木精-伊红(HE)染色评估肾小管损伤,Von-kossa染色评估结石晶体形成,Masson染色评估肾间质胶原纤维沉积,免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fibronectin)及外泌体标志物白细胞分化抗原63(CD63)表达,两组间比较采用t检验。结果HE染色显示,在野生型小鼠中,造模1周、造模2周及造模4周肾小管损伤逐渐加重(0.57±0.18比1.30±0.19,t=6.248,P<0.05;1.30±0.19比2.30±0.28,t=6.642,P<0.05),Von-kossa染色显示,肾脏晶体形成逐渐增加(1.42±0.61比5.24±0.55,t=10.410,P<0.05;5.24±0.55比10.01±0.94,t=9.946,P<0.05),差异均有统计学意义。免疫组织化学染色显示,造模1周、造模2周及造模4周CD63阳性表达面积逐渐增加(1.33±0.34比4.92±0.71,t=10.250,P<0.05;4.92±0.71比8.55±1.04,t=6.448,P<0.05)差异有统计学意义。WT造模组Masson染色胶原纤维沉积面积高于NC组(8.57±0.84比0.60±0.34,t=19.660,P<0.05),α-SMA阳性表达面积高于NC组(11.30±1.04比1.63±0.55,t=18.430,P<0.05),Fibronectin阳性表达面积高于NC组(12.85±0.68比2.78±0.55,t=25.810,P<0.05),差异均有统计学意义。WT造模组Masson染色胶原纤维沉积面积高于KO造模组(8.57±0.84比5.53±0.74,t=6.082,P<0.05),α-SMA阳性表达面积高于KO造模组(11.30±1.04比6.63±0.91,t=7.553,P<0.05),Fibronectin阳性表达面积高于KO造模组(12.85±0.68比8.80±0.93,t=7.875,P<0.05),差异均有统计学意义。结论肾结石形成过程中,肾小管损伤加重,外泌体分泌增加。同时,抑制外泌体分泌能减轻草酸钙晶体诱导
- 夏煜琦周向军饶婷程帆余伟民阮远袁润宁金卓赵胜林方优吴承
- 关键词：肾结石外泌体草酸钙晶体肾间质纤维化
