胡月清
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 供职机构：湖南农业大学生物科学技术学院植物激素与生长发育湖南省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省大学生研究性学习与创新性实验计划项目江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 马铃薯转录因子基因StWRKY57的克隆及其蛋白原核表达被引量：2
- 2021年
- 为了研究马铃薯WRKY57基因(PGSC transcript number PGSC0003DMT400072958)功能,通过RT-PCR克隆得到马铃薯耐旱品种PB06的StWRKY57基因cDNA序列,命名为StWRKY57-PB。利用生物信息学方法对其序列特征进行了分析;以pGEX-KG为基本骨架,构建了StWRKY57-PB蛋白的原核表达载体并在大肠杆菌中进行了表达和纯化分析。结果表明,StWRKY57-PB基因开放阅读框(ORF)长981 bp,编码蛋白属于WRKY转录因子家族Ⅱc类,含326个氨基酸残基,含有WRKY结构域(WRKYGQK)和一个类锌指结构基序(C-X_(4)-C-X_(23)-H-X_(1)-H)。序列比对及构建系统发育树结果表明,它与马铃薯基因组数据库及NCBI公布的WRKY57(XP_006348711.1)有4个氨基酸的差异,与番茄WRKY57分子距离较近,相似性为93%,与拟南芥WRKY57亲缘关系较远,相似性为57%。二级结构预测发现,StWRKY57-PB所编码蛋白由延伸链、α螺旋、β折叠和不规则卷曲组成,四者比例分别为13.50%,16.56%,7.98%,61.96%。在0.5 mmol/L IPTG诱导下,该蛋白质在3种大肠杆菌表达菌株BL21、Rosetta和Tuner中稳定表达,利用GST亲和树脂分离纯化了GST-StWRKY57-PB融合蛋白,Western Blot验证了蛋白质的表达和纯化。对进一步确定该蛋白质的体外活性及生物学功能具有重要意义。
- 胡月清胡月清王若仲黄志刚
- 关键词：马铃薯原核表达
- 拟南芥IAA7的原核表达及稳定性分析
- 2015年
- 以p GEX–KG为基本骨架,构建了拟南芥IAA7蛋白的原核表达载体,用IPTG诱导IAA7在3种大肠杆菌表达菌株Rosetta、BL21和Tuner中表达,利用GST SefiroseTM resin亲和树脂分离纯化GST–IAA7融合蛋白,并分析重组蛋白在体外保存时的稳定性。结果表明:GST–IAA7融合蛋白在Rosetta菌株中于25℃和0.4 mmol/L IPTG诱导下表达较好;蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)可显著延长GST–IAA7在体外保存的时间,最后利用凝血酶切除GST标签后获得了纯化的IAA7蛋白质。
- 刘会珍罗为桂谢伟民胡月清苏益萧浪涛蔺万煌
- 关键词：原核表达蛋白质纯化
- 马铃薯块茎发育期主要植物激素的动态变化被引量：10
- 2019年
- 为了明晰几种主要的植物激素在马铃薯块茎形成中的作用,本研究采用LC-MS/MS法测定了马铃品种‘PB06’及品种‘会-2’块茎发育不同时期叶片、匍匐茎/块茎组织中植物激素ABA、GA3、JA和IAA含量的动态变化。结果显示,随着块茎的发育,匍匐茎/块茎中ABA及JA含量增加;叶片中ABA含量逐渐增加,JA含量先上升后下降,两个品种变化趋势相同。GA3的积累随着匍匐茎的膨大而下降;IAA含量峰值出现在匍匐茎膨大时,并且在之后匍匐茎的膨大中仍然维持高含量水平。表明,IAA及GA3对匍匐茎的伸长是必要的,ABA、JA是诱导块茎形成的正调控因子,GA3为负调控因子。该研究结果对开展植物激素调控块茎形成机理的研究具有重要的支撑作用。
- 刘丹徐梦薇胡月清胡月清王若仲童建华
- 关键词：马铃薯LC-MS/MS
