目的观察干酪乳杆菌代田株（Lactobacillus casei strain Shirota，LcS）对RFP和INH联合用药所致大鼠肝损伤的保护作用。方法将72只无特定病原体（SPF）级雄性SD大鼠，按随机数字表法分为：正常对照组，模型组，LcS低、中、高剂量组，双环醇组，每组12只。模型组，LcS低、中、高剂量组及双环醇组大鼠每天灌胃RFP（50mg／kg）和INH（50mg／kg），2h后LcS低、中、高剂量组大鼠分别灌胃10×10^8、20×10^8、40×10^8菌落形成单位（CFU）／kg的LcS，持续28d。正常对照组大鼠灌胃0．9％生理盐水（20ml／kg），双环醇组大鼠灌胃7．5mg／kg双环醇，每天1次，持续28d。检测大鼠肝脏指数、肝匀浆超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量、血清谷氨酸氨基转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、血清总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）等，并进行比较。结果RFP和INH给药28d后，模型组大鼠肝脏系数升高到（3．14±0．15）％，肝匀浆中MDA和SOD分别达到（4．52±0．52）nmol／mg蛋白和（72．51±11．05）U／mg蛋白；血清ALT和ALP分别达到（65．45±20．10）U／L和（322．79±61．73）U／L，TBA、TBIL、DBIL、IBIL分别达到（91．34±16．93）μmol／L、（7．82±2．53）μmol／L、（4．70±1．29）／μmol／L和（3．69±0．54）μmol／L。LcS补充后，与模型组相比，LcS高剂量组大鼠肝脏系数降低到（2．88±0．12）％；LcS低、中、高剂量组大鼠MDA含量明显下降，分别达到（2．94±0．48）nmol／mg蛋白、（2．82±0．36）nmol／mg蛋白和（2．62±0．28）nmol／mg蛋白；SOD活性明显增强，分别达到（84．60±8．50）U／mg蛋白、（86．28±5．52）U／mg蛋白和（2．62±0．28）U／mg蛋白。与模型组相比，LcS高剂量组的ALT、ALP均降低，分别为（49．92±15．32）U／L和（280．7
目的:研究CD59分子在LAT(Linker for activated T cells)介导的T系淋巴细胞活化中所起的作用。方法:构建LAT-GFP融合蛋白,以逆转录病毒为载体转染Jurkat细胞,建立稳定转染细胞株(Jurkat-GFP)。分别使用CD59抗体刺激和pSUPER-siCD59干扰质粒(GFP标记)沉默Jurkat-GFP细胞。免疫荧光观察CD59和LAT分子在细胞膜的表达和定位;MTT比色法检测细胞增殖率的变化;Western blot检测LAT活化信号转导通路中相关蛋白分子磷酸化水平。结果:荧光显微镜下可见Jurkat-GFP细胞绿色荧光表达于细胞膜,转染干扰质粒后细胞膜和细胞质均有绿色荧光表达。激光共聚焦显微镜下可见CD59抗体刺激前CD59和LAT分子均匀分布于细胞膜,且转染干扰质粒的Jurkat-GFP细胞CD59表达量下降。CD59抗体刺激后CD59分子和LAT分子点状聚集共定位于细胞膜。MTT结果表明相对于正常Jurkat-GFP细胞,抗体活化后细胞增殖速率明显升高(P>0.05),而电转干扰质粒后细胞生长减慢。Western blot结果表明,CD59抗体刺激后细胞ZAP-70、LCK、PLC-r总蛋白表达无明显差异(P>0.05),而磷酸化蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:抗体活化后细胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于细胞膜,且细胞信号转导通路下游分子磷酸化水平增高,进一步证实CD59分子经抗体活化后可促进LAT介导的T细胞信号转导。
