张伟然
- 作品数：3 被引量：15H指数：3
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- 流式细胞术检测小鼠脾细胞内细胞因子刺激方案的筛选被引量：6
- 2010年
- 目的建立流式细胞术检测小鼠细胞内细胞因子的方法。方法取5只BALB/c小鼠建立哮喘模型,4周后处死,制备脾脏单个核淋巴细胞悬液,分别按A、B、C3个刺激方案培养。A方案组:用25ng/mlPMA、1μg/mlIonomy-cin以及10μg/mlBFA刺激4h;B方案组用50ng/mlPMA、1μg/mlIonomycin以及10μg/mlBFA刺激4h;C方案组用3μg/mlConA刺激2d,加入10μg/mlanti-CD3、2μg/mlanti-CD28和10μg/mlBFA后继续刺激5h。培养后各组细胞悬液根据检测目的分成若干检测管,结合固定破膜处理技术,进行细胞表面抗原CD4及细胞内因子IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ染色,用流式细胞仪分析,比较不同刺激条件下各种细胞内因子的表达情况。实验设未刺激对照、激活对照、胞内染色对照及同型对照。结果 A方案组中5只鼠的细胞内因子表达率IL-4为(5.96±1.199)%,IFN-γ为(7.98±3.939)%,IL-10为(4.78±2.366)%,IL-5表达率均低于1%;B方案组中5只鼠的细胞内因子表达率IL-4为(5.76±1.108)%,IFN-γ为(7.44±2.269)%,IL-10为(4.50±1.560)%,IL-5表达率均低于1%;C方案组5只鼠IL-10、IL-5表达率分别为(3.14±0.288)%和(6.82±1.996)%。结论 25ng/mlPMA、1μg/mlIonomycin及10μg/mlBFA刺激4h的方案较适合小鼠淋巴细胞IL-4、IFN-γ的检测;3μg/mlConA刺激2d,加入10μg/mlanti-CD3、2μg/mlanti-CD28和10μg/mlBFA继续刺激5h的方案适合IL-5、IL-10的检测,并且均是从单个核细胞水平对细胞内因子进行检测。
- 李路远刘俊燕钟岗纪彬张伟然刘佩梅
- 关键词：流式细胞术小鼠刺激剂细胞因子
- 日本血吸虫感染鼠树突状细胞对OVA诱导的CCL-11和IL-13R_(α2)的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨过继转移血吸虫感染鼠树突状细胞(DC)对卵清蛋白(OVA)诱导的肺组织细胞CCL-11、IL-13Rα2表达和嗜酸性粒细胞浸润的影响。方法 20只BALB/c小鼠随机分成正常对照组(N组)、单纯哮喘组(OVA组)、诱发哮喘后过继转移血吸虫感染鼠DC组(OVA/SJDC组)和诱发哮喘后过继转移正常鼠DC组(OVA/NDC组)。各组最后一次鼻饲后24 h,处死小鼠,取左肺,切片,行HE染色和免疫组化染色,观察炎症变化,检测CCL-11和IL-13Rα2在肺组织中的表达。结果肺组织切片HE染色显示,OVA/SJDC组小鼠炎症较轻;OVA和OVA/NDC组炎症明显,有大量炎细胞浸润。免疫组化染色显示,OVA、OVA/SJDC和OVA/NDC小鼠肺组织CCL-11阳性区域平均吸光密度值分别为0.387 4±0.023 6、0.254 6±0.017 2和0.316 0±0.023 5,IL-13Rα2阳性区域平均光密度值分别为0.401 4±0.0130、0.280 8±0.010 2和0.326 6±0.014 4,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论日本血吸虫感染鼠DC能抑制OVA诱导的CCL-11和IL-13α2表达,从而对哮喘有治疗作用。
- 钟岗刘俊燕李路远王世忠纪伟华安桂珍张伟然刘佩梅
- 关键词：树突状细胞过继转移
- 日本血吸虫感染鼠树突状细胞对哮喘抑制作用的实验研究被引量：9
- 2008年
- 目的通过过继转移日本血吸虫感染鼠树突状细胞(DC),探讨DC在抑制过敏性哮喘中的作用及机制。方法用CD11c+磁珠分离纯化日本血吸虫感染鼠及正常鼠DC亚群CD11c+细胞。将15只BALB/c小鼠随机分为3组,A组为过继转移日本血吸虫感染鼠DC并诱发过敏性哮喘组,B组为过继转移正常鼠DC并诱发过敏性哮喘组,C组为单纯过敏性哮喘组。A、B两组小鼠经尾静脉过继转移1×106DC,2 h后A、B、C 3组均开始诱发哮喘。4周后处死小鼠,收集肺泡灌洗液,检测细胞因子IL-4I、L-5及IFN-γ水平;取小鼠肺组织作病理切片,观察其炎症变化。结果与B、C组比较,A组肺部炎症明显减轻,按Underwood标准,A、B、C 3组总评分分别为5.00±1.58、11.40±2.07和13.20±2.86,差异有统计学意义(P<0.05)。A、B、C组小鼠肺泡灌洗液IL-4水平分别为(23.25±1.57)pg/ml、(40.70±3.28)pg/ml和(65.23±4.84)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05);IL-5水平分别为(16.20±4.11)pg/ml、(41.41±7.14)pg/ml和(64.75±16.96)pg/ml,IFN-γ水平分别为(6.60±2.34)pg/ml(、6.94±2.19)pg/ml和(5.87±2.44)pg/ml,差异无统计学意义(P>0.05)。结论日本血吸虫感染鼠DC通过影响受体鼠Th2细胞因子的分泌明显抑制过敏性哮喘的发生。
- 沈跃云杨秀珍李健王世中吴增强刘金霞钟岗张伟然刘佩梅
- 关键词：过敏性哮喘树突状细胞过继转移
