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辣椒三种病毒的多重RT-PCR同步检测被引量：2: 2017年; 本研究根据辣椒轻斑驳病毒(PMMo V)、烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白(CP)编码序列设计了3对PCR检测引物,并初步建立了同步检测以上3种辣椒病毒的多重RT-PCR方法。以被感染了3种病毒的叶片的总RNA作为模板,可同时扩增到324 bp(TMV)、220 bp(PMMo V)和112 bp(CMV)的3个目标条带,在电泳图上清晰可辨。测序结果表明所扩增产物确为待检病毒靶序列。除阳性对照外,该多重RT-PCR体系不对ORSV、PVX和PVY等同属或不同属的其它病毒发生反应;该体系可检测到104倍稀释的病毒c DNA模板。同时,以建立的三重RT-PCR法对10份田间辣椒病样进行检测,其结果与单重RT-PCR结果一致,说明该法检测结果可靠,可用于PMMo V、TMV和CMV 3种辣椒病毒的同步检测。; 丁超李欲轲刘倩万晴姣乙引洪鲲; 关键词：辣椒病毒检测多重RT-PCR

建兰花叶病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：2: 2017年; 采用RT-PCR技术扩增出建兰花叶病毒贵州分离物(CyMV-GZ)的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列。测序结果表明:该RdRp基因序列长735 bp,编码245个氨基酸残基。构建原核表达载体pET32a(+)-RdRp,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃以0.3 mmol·L^(-1) IPTG诱导表达分子量约49 kDa重组蛋白。以该重组蛋白为抗原免疫小鼠,制备的抗体效价达1∶204 800。间接ELISA检测显示该多抗与CyMV病叶汁发生特异性免疫反应,而与其他6种同属或不同属病毒叶汁无血清学交叉反应。本实验为进一步研究RdRp的功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定了基础。; 万晴姣吴正强李欲轲乙引龚记熠刘倩洪鲲; 关键词：建兰花叶病毒 RDRP 原核表达多克隆抗体

齿兰环斑病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 2019年; 采用RT-PCR法从感染齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)贵州分离物的苋色藜叶片中扩增出病毒的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列。测序结果显示,该保守片段长516bp,编码171个氨基酸残基。构建了该片段的原核表达载体pET32a-ORSV RdRp并转化BL21(DE3)菌株,在25℃以0.4mmol·L^(-1)IPTG诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为36 kDa,与预测相符合。将该重组蛋白作为抗原免疫BABL/C小鼠,制备的多克隆抗体效价达1∶102 400。间接ELISA结果表明,该多抗具有较强的特异性,能检测到ORSV感染的病叶汁液中的RdRp,而与其它感染4种同属或不同属病毒的病叶汁液不发生血清学交叉反应,本实验为进一步研究RdRp的结构和功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定基础。; 万晴姣刘倩刘倩龚记熠张宇斌张宇斌洪鲲; 关键词：齿兰环斑病毒 RDRP 原核表达多克隆抗体

贵州金线鲃属鱼类一新种记述(鲤形目,鲤科)被引量：2: 2011年; 描记2009年8月采自贵州省荔波县茂兰自然保护区内洞塘乡地下河中的金线鲃属一新种,命名为洞塘金线鲃Sinocyclocheilus dongtangensis Zhou,Liuet Wang,sp·nov,正模标本编号为:20091123005,全长213·02mm,体长167·12mm;副模标本编号:20091123002,全长182·36mm,体长139·26mm。背鳍ⅲ-8,臀鳍ⅲ-5,胸鳍ⅰ-15-16,腹鳍ⅱ-8,尾鳍分枝鳍条16,不分枝鳍条10,下咽齿3行,2·3·4-4·3·2。该种的胸鳍和臀鳍等性状以及体形大致与巨须金线鲃S.hugeibarbus、高肩金线鲃S.altishoulderus和尧兰金线鲃S.yaolanensis相似,但新种的侧线鳞和第1鳃弓鳃耙数与三者都有一定差距,新种的侧线鳞为652160--218667;巨须金线鲃为661428-1-631-v71;高肩金线鲃为5491-41-11-7v58;尧兰金线鲃为521200--211154。新种的第1鳃弓鳃耙数为15;巨须金线鲃为9～11;高肩金线鲃为10～12;尧兰金线鲃为12～14。; 周江刘倩王海霞杨隆娇赵大成张天鸿侯秀发; 关键词：鲤科

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刘倩