邓学鹏
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结缔组织生长因子肽对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:观察结缔组织生长因子肽(P1c)对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响。方法:观察不同剂量(2、4、8 mg.kg-1)的P1c静脉给药对动静脉旁路血栓模型大鼠血栓形成的影响。结果:P1c高、中剂量组和阳性药阿司匹林组血栓湿重较生理盐水组显著下降(P<0.05),剂量与血栓形成抑制率呈明显正相关(r=0.997,P<0.05)。结论:P1c具有良好的抗血栓作用。
- 林江周瑾邓学鹏吴国球
- 关键词：血栓形成
- 幽门螺杆菌多表位肽在毕赤酵母中的分泌表达
- 2012年
- 构建分泌表达幽门螺杆菌多表位肽CTB-UE的毕赤酵母。以原核表达载体pET-22b-CTB-UE为模板,通过PCR扩增得到融合His-tag的ctb-ue基因序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,得到重组表达载体pPIC9K-CTB-UE。重组表达载体pPIC9K-CTB-UE经内切酶Sal I线性化后,电击转化进毕赤酵母GS115,通过组氨酸缺陷性MD平板筛选重组菌株,G418抗性筛选多拷贝转化子,阳性转化子经PCR鉴定,摇瓶发酵表达,取上清经过超滤浓缩,Ni-NTP亲和层析纯化,透析脱盐,SDS-PAGE检测,Western blot验证。结果获得了整合有ctb-ue基因的毕赤酵母,诱导后分泌表达的CTB-UE蛋白能够与His-tag抗体发生特异性反应。成功构建了分泌型毕赤酵母GS115(pPIC9K-CTB-UE),能分泌表达幽门螺杆菌多表位肽CTB-UE。
- 陈春梅郭乐张蕊邓学鹏何赟绵奚涛
- 关键词：幽门螺杆菌毕赤酵母分泌表达聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质印迹
- 重组抗菌肽S-thanatin的表达纯化及不同MIC鉴定方法对其结果的影响
- 2011年
- 目的:获得重组抗菌肽S-thanatin(Ts)在大肠杆菌的可溶性表达及分离纯化方法,通过不同方法鉴定Ts的最低抑菌浓度(MIC),揭示不同方法对结果的影响。方法:利用基因重组手段构建表达质粒pET32a-Ts,转化大肠杆菌BL21(DE3),可溶性表达Ts融合蛋白,利用镍柱亲和层析纯化出融合蛋白,透析以后经凝血酶酶切,再通过葡聚糖凝胶G-50纯化除去融合伴侣TRX,最后冻干精制得到Ts冻干粉。利用玻璃管的常量肉汤稀释法、聚苯乙烯和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法和MH琼脂打孔法测定阳离子肽Ts的抑菌活性。结果:Ts在大肠杆菌中成功可溶性表达并获得85%以上纯度的目的蛋白。不同测定方法显示,Ts对同一菌株具有不同的MIC,以常量肉汤稀释法和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法测定的多肽抑菌活性效果最佳。结论:Ts在工程菌BL21(DE3)中得到高表达,纯化出后具有较高的抑菌生物活性。不同方法测定出差异化MIC表明,阳离子肽Ts的抑菌活性易受实验材料材质影响。
- 李小芳邓学鹏王西勇薛秀蕾王升兰沈子龙奚涛吴国球
- 关键词：大肠杆菌表达纯化抗菌活性
- 两种方法测量抗菌肽s-thanatin大鼠体内血药浓度的结果比较被引量：2
- 2011年
- 目的:分别用间接竞争ELISA法和放射性同位素标记法测定不同时间点抗菌肽s-thanatin(Ts)在动物体内的血药浓度变化,比较两种方法测量结果的差异并分析原因。方法:制备Ts的多克隆抗体,分离纯化多克隆抗体并建立间接竞争ELISA方法的标准曲线。用125I对Ts进行标记,制作同位素标记法的标准曲线。18只SD大鼠随机分为3组,分别按20、10和5 mg.kg-1的剂量尾静脉注射给药(放射性同位素标记法中注射Ts为125I-Ts),于给药后不同时间点眼眶取血,分别用两种方法测定动物体内血药浓度,计算药物半衰期。最后,比较两种方法测量结果的差异,并对其进行分析。结果:间接竞争ELISA法测得Ts在动物体内的半衰期为1.5 h左右,而用放射性同位素标记法测得的半衰期为6 h左右。放射性同位素法测得的生物利用度大约为间接竞争ELISA法的20倍。结论:同位素示踪法测得的药物浓度为动物体内药物代谢物的总量,因此需要借助其它分析仪器才能进行准确的定量试验。
- 王升兰李小芳王西勇邓学鹏吴国球沈子龙奚涛
- 关键词：ELISA法放射性同位素标记血药浓度
- 一种高效制备重组抗菌肽S-thanatin的方法被引量：1
- 2012年
- S-thanatin是一个含有21个氨基酸的抗菌肽,以融合形式在大肠杆菌体内表达,载体构建时人工设计了一个凝血酶位点。为降低重组抗菌肽S-thanatin的生产成本以利于工业化生产,探索了一个处理速度快且成本较低的分离纯化策略。通过大肠杆菌pET-32a/BL21(DE3)系统高效可溶表达融合蛋白后,首先分析了融合蛋白的表达部位,然后利用融合蛋白热稳定性高的性质通过加热去除不耐热的大分子质量蛋白,同时降低蛋白酶对融合蛋白的影响。离心后溶液通过中空纤维超滤来浓缩融合蛋白,之后进行固定化凝血酶酶切。酶切后的TrxA片段和目的多肽利用其分子质量的差异,使用超滤膜包进行分离,最后使用制备反相高效液相对S-thanatin进行精制,并检测其对大肠杆菌ATCC 25922的抗菌活性。结果表明,通过这一简单的纯化工艺,可制备出纯度95%以上的S-thanatin,并具有很好的抗菌活性。
- 邓学鹏武朋朋沈子龙徐寒梅
- 关键词：抗菌肽分离纯化凝血酶固定化
