王静
- 作品数：14 被引量：67H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学理学更多>>
- 微生态制剂规模化猪场的应用
- 随着抗生素在畜禽生产当中的广泛应用乃至滥用,其所产生的负面效应逐渐明显,研发和推广绿色环保的抗生素替代品对消除抗生素负面效应及推动我过养猪业的绿色可持续发展具有重要意义。本文综述了微生态制剂在规模化猪场的应用。
- 刘存刘琪刘畅罗亚坤王静崔尚金
- 关键词：微生态制剂规模化猪场抗生素
- 文献传递
- PCV2和PCV3双重纳米PCR方法的建立及初步应用被引量：6
- 2017年
- 本研究旨在建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重纳米PCR(nanodPCR)方法,同时应用该方法对PCV2和PCV3进行检测。参考GenBank中登录的PCV2和PCV3型基因序列分别设计特异性引物,对nano-dPCR的反应条件进行优化;同时考察所建立的nano-dPCR检测方法的特异性和敏感性。结果显示,所建方法的特异性和敏感性良好,对PCV2和PCV3两种病毒的最低核酸检测量分别为93.2和91.6拷贝/μL,其敏感性比普通PCR高100倍。应用该方法对送检的265份临床样本进行检测,结果显示,PCV2和PCV3在猪群中存在普遍感染,PCV3和PCV2的阳性率分别为16.6%和14.7%,混合感染阳性率为6.8%。临床样品的检测结果表明,本试验建立的nano-dPCR方法为PCV2和PCV3早期感染进行快速、敏感鉴别诊断提供了新方法。
- 梁琳逄春华罗亚坤罗亚坤王静周灵刘琪王静
- 关键词：病原检测
- 在美国与致命性新生幼犬肠炎相关的犬冠状病毒的基因型特征
- <正>据欧盟报道新出现的犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)变异株可导致全身感染,然而,美国的犬冠状病毒病并未出现这一症状。本项研究以2008年至2013年期间,由五个州的九个犬养殖厂送至康奈尔大...
- 王静崔尚金
- 关键词：冠状病毒感染抗原分布
- 文献传递
- CDV、CPV、CAV-2及CPIV多重PCR的建立及应用被引量：5
- 2017年
- 为建立一种快速检测犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒Ⅱ型(CAV-2)和犬副流感病毒(CPIV)的多重PCR方法,参照Gen Bank中的相关病毒基因序列,分别设计了4对引物,用于特异性扩增CDV H基因、CPV VP2基因、CAV-2 E3基因和CPIV NP基因上的目的片段。通过优化反应条件,建立了同时扩增CDV(410 bp)、CPV(253 bp)、CVA-2(655 bp)和CPIV(868 bp)的多重PCR方法。利用建立的多重PCR方法,对CDV、CPV、CAV-2、CPIV、CDV+CPV+CAV-2+CPIV和犬冠状病毒(CCV)的DNA或c DNA模板进行扩增,发现该方法的特异性良好。利用建立的多重PCR方法与单一PCR方法进行敏感性比较,发现两者敏感性相差10倍,证明多重PCR方法敏感性良好。利用该方法对从北京市采集的30份犬病料样品进行检测,发现CDV阳性率为63.33%(19/30)、CPV阳性率为33.33%(10/30)、CAV-2阳性率为6.66%(2/30)、CPIV阳性率为0(0/30)。检测结果证明建立的多重PCR方法可用于临床诊断。
- 刘畅刘畅刘存王静刘存梁琳王静钱爱东刘琪
- 关键词：多重PCR犬瘟热病毒犬细小病毒犬副流感病毒
- A型猪塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断研究进展被引量：1
- 2020年
- 为了进一步了解A型猪塞内卡病毒的特征,通过查阅并总结A型猪塞内卡病毒文献,对A型猪塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断方法等方面进行综述,以期提高人们对A型猪塞内卡病毒的认识和防控意识。
- 刘存刘畅刘畅王静刘琪崔尚金王静
- 关键词：小RNA病毒
- A型塞内卡病毒病原学、流行病学和诊断研究进展被引量：8
- 2018年
- 为了进一步了解A型塞内卡病毒的特征,通过查阅与A型塞内卡病毒相关的文献,对A型塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断方法等方面进行综述,以期提高人们对A型塞内卡病毒的认识及防控意识。
- 刘存刘畅刘畅王静刘琪崔尚金王静
- 关键词：小RNA病毒
- 脑心肌炎病毒VP2基因编码蛋白的生物信息学分析及纳米PCR快速检测方法的建立
- 本研究以脑心肌炎病毒(Encphalomyocarditis virus,EMCV) HB10株VP2基因为目的基因,建立EMCV快速诊断方法；并对VP2基因进行克隆、测序并用生物信息学技术分析EMCV-HB10-VP2...
- 罗亚坤王静史利军梁琳蔺文成崔尚金
- 关键词：脑心肌炎病毒VP2基因生物信息学分析
- 猪脑心肌炎病毒纳米PCR快速检测方法的建立
- 引言脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(Encphalomyocarditis virus,EMCV)引起的猪、某些哺乳动物乃至灵长类动物以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要临床特征的一种急性传染病。EMCV分布广泛,呈世界范围分布,...
- 罗亚坤王静史利军梁琳蔺文成崔尚金
- 文献传递
- 猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3C的原核表达及生物信息学分析被引量：1
- 2017年
- 为获得猪脑心肌炎病毒(EMCV)3C蛋白并进一步了解其结构,本研究以EMCV HB10株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增3C基因,将其克隆至pMD18-T载体,经PCR、双酶切和测序鉴定,挑选测序正确的质粒经双酶切获得目的片段并将其克隆至pET32a载体以构建重组原核表达质粒。将重组质粒转化至大肠杆菌TranSetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况,Western blotting检测纯化后3C蛋白及其对EMCV的反应原性。结果显示,成功克隆3C基因,长度为615bp,编码205个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,3C蛋白主要以包涵体形式表达,His-3C蛋白大小约为40ku。Western blotting分析可知,纯化后His-3C蛋白条带单一,同时3C蛋白与EMCV细胞毒有良好的反应原性。经生物分析软件预测可知,EMCV 3C蛋白为非分泌蛋白,无跨膜区,有多个磷酸化位点,参与蛋白的水解过程。3C蛋白酶作为EMCV基因组编码蛋白中唯一的蛋白酶,在病毒复制的过程中具有不可或缺的作用。本研究成功构建了EMCV 3C蛋白原核表达载体并对其结构进行了预测,为进一步研究3C蛋白的作用及催化机理奠定基础。
- 罗亚坤梁琳朱禹王静刘琪刘存崔尚金
- 关键词：脑心肌炎病毒原核表达生物信息学分析
- 猪流行性腹泻病毒环介导等温扩增检测方法的建立及应用被引量：17
- 2017年
- 试验旨在建立一种快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增方法(LAMP),为诊断PEDV提供简便、敏感、准确可靠的工具。参考GenBank中PEDV基因序列(登录号:KT799997),针对PEDV N基因设计了6条引物,对所建立的LAMP反应体系、反应温度进行优化,建立可特异性扩增PEDV的LAMP方法。结果显示,本试验成功建立了PEDV LAMP检测方法,在60℃恒温下反应60min,能特异性地检测PEDV,检测限量为91拷贝/μL,比常规PCR方法的敏感性高100倍。对比75份临床样本的LAMP和常规RT-PCR法检测结果,显示两种方法符合率为97.3%。综上所述,本试验建立的LAMP方法具有特异性强、敏感性高,操作简单,设备要求低的特点,适用于PEDV临床样本的快速检测。
- 罗亚坤梁琳王静刘存刘琪刘畅蔺文成崔尚金
- 关键词：猪流行性腹泻病毒环介导等温扩增技术
