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中华根瘤菌NP1中反硝化基因启动子分析及荧光定量PCR验证被引量：1: 2019年; 目前,在污水脱氮过程中N_2O的释放量逐年上升,造成温室效应,引起酸雨并破坏臭氧层。为了研究在反硝化过程中N_2O释放的机制,利用生物信息学软件在线预测了中华根瘤菌NP1反硝化过程中4个关键酶基因的启动子信息。经预测,反硝化过程所需的4个关键酶基因的表达并非传统观念上认为的使用同一个启动子,而是4个不同的启动子。同时还发现,硝酸盐还原酶和亚硝酸盐还原酶的启动子转录活性较强,而一氧化氮还原酶和氧化亚氮还原酶的启动子则转录活性较弱。为进一步探究上述预测结果,我们利用荧光定量PCR检测中华根瘤菌NP1中以KNO_3为唯一氮源培养时,反硝化4个关键酶基因转录水平上的差异,以及测量反硝化过程中产生的代谢产物含量。发现硝酸盐还原酶基因和亚硝酸盐还原酶基因的转录水平明显高于一氧化氮还原酶基因和氧化亚氮还原酶基因,在反硝化过程中确实有一定量的N_2O气体积累,推测可能与不同启动子的强弱有关。因此,可通过改造操纵子等基因工程手段调节反硝化关键酶的表达,使N_2O全部还原为N_2后再释放到空气中,构建更加高效绿色的污水脱氮菌株,具有深远的社会意义。; 张宇王森陈度宇许雷; 关键词：反硝化 N2O 启动子转录活性

鞘氨醇胞菌B1咔唑降解基因carB的克隆与功能研究: 2018年; 以分离到的咔唑高效降解菌鞘氨醇胞菌B1为材料,研究该菌株咔唑降解基因簇的组成和表达模式,阐释咔唑降解过程中关键酶的作用机理。通过分析不同菌株咔唑降解基因簇中基因的保守区,从菌株B1中成功克隆得到基因簇中car Aa、car Ba、car Bb和car C基因片段。通过RT-PCR证实菌株B1的咔唑降解基因簇为诱导表达。通过同源克隆得到降解关键基因car B和编码两个亚基的car Ba、car Bb基因,并在大肠杆菌中进行了异源表达。以2,3-二羟基联苯为底物,对Car B粗酶液进行了酶学性质分析。研究表明Car B蛋白催化最适p H和温度分别为7.4和30℃,Fe2+能显著提高酶的催化活力。; 边晨凯张宇陈度宇王森许雷; 关键词：咔唑降解基因酶学性质

一株咔唑降解菌的鉴定及其降解特性研究被引量：1: 2017年; 从青海油井口污泥中,分离出一株能高效降解咔唑的细菌B1。采用富集培养法筛选降解菌株,并利用生理生化特征及16S r DNA基因序列分析鉴定菌株种类,利用高效液相色谱法测定培养液中咔唑浓度。研究菌株在不同p H、盐浓度、温度等条件下的降解能力,及外加碳源、氮源和底物浓度对降解效率的影响。经鉴定,菌株B1属于Sphingosinicella sp.。最适温度和p H分别为30℃和7.0,最适条件下菌株B1在72 h内对100mg/L咔唑的降解率可达到98%,同时该菌株在盐浓度小于10 g/L时降解率较高。此外,研究结果显示,添加0.1 g/L的葡萄糖和硫酸铵能明显提高其降解效率,且菌株B1能耐受700 mg/L浓度的咔唑。研究表明,菌株B1具有高效降解咔唑的能力及良好的环境适应性。; 边晨凯张宇陈度宇许雷; 关键词：咔唑生物降解环境因素

一株缩合单宁降解菌的筛选、鉴定及降解效果分析被引量：6: 2018年; 为了筛选分离到能够降解缩合单宁的细菌并探究其降解能力,以牛羊粪土为菌源,用梯度驯化法最终分离筛选得到1株能够以缩合单宁为单一碳源生长的降解菌,经形态特征观察、Biolog生理生化测试及16S rRNA基因序列比对分析鉴定,菌B1为1株革兰氏阴性菌,属于肠杆菌属(Enterobacter sp.),在构建的系统发育树上与Enterobacter xiangfangensis 10-17T聚为一支。综合运用紫外分光光度法和高效液相色谱法检测,测得菌B1培养24 h最大OD600值达2.5左右,以计算出的原花青素、儿茶素变化量为指标分析菌B1对缩合单宁的降解能力,即菌B1对落叶松单宁降解率在72 h达90%以上且有儿茶素生成;进一步探究外加碳氮源对菌B1降解情况的影响,实验结果表明,外加氮源可以略微提升菌B1的降解能力,而外加碳源则会使降解率降低。研究结果对于丰富缩合单宁整体研究、提升缩合单宁的应用价值及进一步探究缩合单宁的微生物降解机制都有一定意义。; 陈度宇王森张宇许雷; 关键词：缩合单宁原花青素儿茶素肠杆菌生物降解

中华根瘤菌NP1亚硝酸盐还原酶基因的表达和酶学性质研究被引量：1: 2016年; [目的]研究中华根瘤菌NP1(Sinorhizobium sp.NP1)中亚硝酸盐还原酶基因(nir)的原核表达情况以及粗酶液的化学性质。[方法]构建该基因的原核表达载体p ET32a-nir,然后对重组蛋白质进行SDS-PAGE和Western blotting分析获得NIR酶在原核生物中的表达情况。通过测定粗酶液对亚硝酸盐降解情况研究相关酶学性质。[结果]SDS-PAGE检测结果表明,可溶性融合表达产物约为57 ku,其中亚硝酸盐还原酶大小约40 ku,与酶分子量的预估值一致;Western blotting证实该蛋白可与根据亚硝酸盐还原酶合成的多克隆抗体发生强阳性反应;酶学性质分析表明,亚硝酸盐还原酶活力约为247.15 U/m L,最适pH 6.5,最适反应温度37℃,该酶对Na Cl的耐受性为0.3 mol/L。[结论]亚硝酸盐还原酶蛋白重组质粒能在大肠杆菌系统中高效表达,研究其酶学性质为NO_2^-生物清除提供了技术保障。; 袁会兰边晨凯陈度宇张宇许雷; 关键词：中华根瘤菌原核表达

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张宇