- cGAS通过调控固有免疫应答抑制HTLV-1在HeLa细胞中复制被引量：4
- 2017年
- 目的 探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染HeLa细胞过程中的功能及其作用机制.方法 将HeLa细胞与MT2细胞（HTLV-1阳性T细胞）共培养,采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化;构建带有血凝素（HA）标签的cGAS表达质粒,转染入HeLa细胞24 h后与MT2细胞共培养24 h,免疫印迹试验检测HeLa细胞中HTLV-1病毒蛋白Tax和p19的表达量,real-time PCR检测HeLa细胞中HTLV-1病毒基因Tax、p19、Env、HBZ以及px转录本的量,同时免疫印迹试验检测干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平,real-time PCR检测干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达量.结果 与MT2细胞共培养后,HeLa细胞中cGAS的表达升高;转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比,在与MT2细胞共培养后,Tax和p19在蛋白水平上的表达量减少,Tax、p19、EnV、HBZ以及px转录本的量减少,IRF3和p65的磷酸化水平升高,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加.结论 cGAS在HTLV-1感染的HeLa细胞中可能具有促进固有免疫应答并抑制HTLV-1病毒复制的功能.
- 马玲玲郭志祥宋迪刘月崔钰晗关宇鹤杨波王洁
- 关键词：逆转
- 细胞自噬与病毒感染被引量：4
- 2017年
- 自噬是一种高度保守的生理代谢途径,双层膜囊泡将其内容物运送到溶酶体进行降解。因此,自噬是哺乳动物细胞清除胞内病毒等病原体的一种手段。然而,在病毒感染过程中自噬的角色比较复杂,一些病毒已进化出逃逸自噬依赖性降解的方法,甚至利用自噬为自己的复制而服务。本文主要综述了自噬的基本机制和功能、自噬在病毒感染中的角色以及自噬在人类免疫缺陷病毒和T细胞白血病病毒1型等反转录病毒感染过程中的作用。
- 杨帅刘璐宋迪王洁杨波
- 关键词：自噬病毒感染反转录病毒
- cGAS促进HTLV-1反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答被引量：1
- 2018年
- 目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能。方法将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞，采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化；将cGAS表达质粒，转染入HeLa细胞，24 h后再转染入ssDNA90，real-time PCR试验检测HeLa细胞中干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达，免疫印迹试验检测HeLa细胞中干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平；采用siRNA的方法在HeLa和佛波酯（phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）诱导分化的THP1（PMA-THP1）细胞中沉默cGAS的表达，24 h后再转染入ssDNA90，real-time PCR试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达，免疫印迹试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IRF3和p65的磷酸化水平。结果ssDNA90转染后，HeLa细胞中cGAS的表达升高；转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比，在ssDNA90刺激后，IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加，IRF3和p65的磷酸化水平升高；沉默cGAS表达的HeLa和PMA-THP1细胞与对照组细胞相比，在ssDNA90刺激后，IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量降低，IRF3和p65的磷酸化水平下降。结论cGAS在HTLV-1的反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答中可能具有促进功能。
- 郭志祥宋迪刘月崔钰晗马玲玲关宇鹤杨波王洁
- 关键词：固有免疫应答
- Ku70对HTLV-1阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响
- 2018年
- 目的:探讨Ku70对人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响。方法:Western blot实验检测不同的HTLV-1阳性T细胞系中Ku70的表达水平;构建Ku70基因沉默siRNA并通过Western blot实验检测其敲减Ku70表达的效率;采用siRNA在HTLV-1阳性的T细胞中敲减Ku70表达后,通过real-time PCR和Western blot实验分别检测HTLV-1病毒蛋白在mRNA和蛋白水平上的表达量,并通过real-time PCR实验检测干扰素和促炎因子的表达量。结果:HTLV-1阳性T细胞系MT2、MT4及C8166中的Ku70均呈高表达;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中的HTLV-1病毒蛋白表达量上升;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中干扰素α、干扰素γ及肿瘤坏死因子α的表达下降。结论:Ku70在HTLV-1阳性T细胞中高表达;在HTLV-1阳性T细胞中,Ku70促进干扰素和促炎因子的表达,抑制HTLV-1病毒蛋白的表达。
- 宋迪马玲玲郭志祥刘月崔钰晗关宇鹤杨波王洁
- 关键词：干扰素肿瘤坏死因子Α
- cGAS识别HTLV-1反转中间体并诱导STING依赖性的固有免疫应答被引量：4
- 2019年
- 目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染过程中对病毒反转中间体的识别以及诱导的下游信号通路。方法将生物素标记的HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫共沉淀试验检测cGAS与ssDNA90的相互作用;将HeLa细胞与HTLV-1阳性细胞系MT2共培养,采用免疫共沉淀的方法检测cGAS与干扰素基因刺激蛋白(STING)的相互作用;采用siRNA的方法在HeLa细胞中敲减STING,24 h后再转染入cGAS表达质粒,24 h后与MT2细胞共培养24 h,real-time PCR实验检测HeLa细胞中干扰素(IFN)-β、调节活化正常T细胞表达和趋化因子(RANTES)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、HTLV-1病毒蛋白Tax、p19以及HBZ的表达,免疫印迹检测HeLa细胞中干扰素调节因子3(IRF3)和p65的磷酸化水平。结果cGAS与ssDNA90存在相互作用;cGAS与STING存在相互作用,且作用部位在胞质中;在敲减STING的HeLa细胞中,cGAS过表达对IFN-β、RANTES和TNF-α的表达量无明显影响,对HTLV-1病毒蛋白Tax、p19和HBZ的表达量无明显影响,对IRF3和p65的磷酸化水平无明显影响。结论cGAS可结合HTLV-1的反转中间体ssDNA90并通过STING激活固有免疫应答。
- 刘月崔钰晗宋迪关宇鹤陈凡陈蒙蒙杨波王洁
- 泛素化修饰对干扰素基因刺激因子介导的固有免疫信号通路的调控
- 2017年
- 自20世纪70年代发现泛素可以调节蛋白降解过程后,科研人员针对泛素化修饰相关问题开展了一系列研究。目前已阐明泛素是一种多功能的分子标志物,它可以通过蛋白酶体依赖与非蛋白酶体依赖2种途径来调控各种细胞过程。多聚泛素链与靶蛋白之间不同的连接方式决定了靶蛋白特定的生理和病理功能。近年来研究发现,泛素化修饰在宿主抗胞内RNA或DNA病毒感染的过程中起到了至关重要的作用,而干扰素基因刺激因子(STING)是抗病毒感染中的关键分子。因此,本文主要总结了泛素化修饰对STING调控的研究进展,并讨论了在今后的研究中有待解决的一些关键问题。
- 宋迪杨帅刘璐杨波王洁
- 关键词：泛素化修饰
