于洋
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市教委科研基金国家自然科学基金更多>>
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- 钩端螺旋体重组鞭毛蛋白与钩体病患者血清学检测
- 2012年
- 目的钩端螺旋体鞭毛蛋白FlaB1、FlaB2、FlaB3和FlaB4与钩体病患者血清反应的研究。方法根据钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株(56601)的基因组序列,对4个编码鞭毛丝状体蛋白基因LA2017、LA2019、LA2417、LA2418进行克隆表达,并纯化得到的重组蛋白,进一步制备多克隆抗体。Western Blot检测这4个蛋白在体外培养钩体中的表达情况,ELISA检测在钩体病患者血清中抗体的表达情况。结果 FlaB1、FlaB2、FlaB3和FlaB4均在体外培养的钩端螺旋体56601株中表达;FlaB1、FlaB2和FlaB4的相应抗体在钩体病患者血清中检测出、FlaB1和FlaB2的相应抗体在其它致病性钩体感染患者血清中测出、FlaB1和FlaB4的相应抗体在疫苗免疫正常人血清测出,且均与正常对照具有显著性差异。结论 FlaB1、FlaB2和FlaB4可能与钩体的致病有一定的关系,FlaB1和FlaB4,特别是FlaB1可作为疫苗候选蛋白或诊断蛋白,值得进一步研究。
- 于洋张湘燕张怡轩秦金红赵蔚
- 关键词：钩端螺旋体鞭毛蛋白
- 钩端螺旋体外膜蛋白LipL45相关基因的保守性分析及在诊断中的初步应用被引量：2
- 2009年
- 目的:分析外膜蛋白LipL45在不同致病性钩端螺旋体中的同源性,初步探讨其在钩端螺旋体病诊断中的应用价值。方法:克隆表达外膜蛋白LipL45相关基因,用酶联免疫吸附试验和显微凝集试验分别测定其抗血清效价和抗体活性。以15株不同致病性钩端螺旋体的基因组DNA为模板PCR扩增此外膜蛋白基因序列,通过测序进行同源性分析。表达产物作为包被抗原与部分钩端螺旋体患者血清反应,评估其作为诊断抗原的可行性。结果:免疫印迹法结果显示,抗血清能识别大多数致病性钩端螺旋体菌体蛋白,显微凝集试验结果也显示此外膜蛋白抗血清与大多数致病性钩端螺旋体凝集反应呈阳性。用重组LipL45蛋白包被96孔板作酶联免疫吸附试验检测显示,此蛋白抗原与22名感染者血清呈现不同水平的免疫阳性反应,而与10份正常人血清呈阴性反应(P<0.01)。核酸序列分析显示,LipL45相关基因在致病性钩端螺旋体L. interrogans中比较保守,在另2种致病性钩端螺旋体L. borgpetersenii和L.weilii中不存在或同源性较低。而在非致病性腐生型钩端螺旋体中未得到相应PCR扩增产物。结论:钩端螺旋体外膜蛋白LipL45相关基因作为问号钩端螺旋体的保守基因可用于钩端螺旋体的基因分型,其重组表达产物在钩端螺旋体诊断及疫苗研究中具有一定的应用前景。
- 张湘燕于洋王亚琳何平胡宝瑜聂一新蒋秀高郭晓奎
- 关键词：基因分型
