韩雪英
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家肉牛牦牛产业技术体系项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 牦牛源副乳房链球菌的分离鉴定及部分生物学特性分析被引量：1
- 2021年
- 从青海省某养殖场牦牛肺脏中分离出3株细菌,通过生化试验、16S rDNA序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验检测。结果发现,这3株细菌为革兰氏阳性链球菌,与副乳房链球菌(Spu)同源性为99%;分离株在TSA琼脂培养基上呈光滑圆形,半透明的菌落,在血琼脂上呈α溶血;其中Spu-1分离株对小鼠具致病性;药敏试验显示,分离菌株均对链霉素耐药,对红霉素、阿奇霉素、万古霉素和麦迪霉素敏感。研究结果为了解牦牛副乳房链球菌的流行情况提供了新资料。
- 罗弼豪韩雪英常振宇郭抗抗
- 关键词：牦牛致病性试验药敏试验
- SYBR荧光定量PCR方法分析猪瘟石门强毒的组织分布被引量：5
- 2013年
- 为研究急性感染期猪瘟病毒在组织中的分布,本试验建立了猪瘟病毒实时定量PCR检测方法,通过与普通PCR及套式PCR方法比较,发现实时定量PCR具有较高的灵敏度和特异性,能够用于猪瘟病毒的检测;以此方法为基础,对人工接种猪瘟石门强毒急性死亡猪体内病毒分布进行了检测,结果发现急性感染期猪瘟病毒主要集中在扁桃体、脾脏、淋巴结及回肠。本研究初步揭示了猪瘟强毒在急性感染期死亡猪体内的分布情况,为猪瘟致病机理及感染控制的研究奠定了基础。
- 牛金鹏韩雪英郝华芳孙孟娇杜恩岐张淑霞杨增岐党如意王兴龙
- 关键词：猪瘟
- 陕西省屠宰生猪PCV2检测及其遗传变异分析被引量：4
- 2021年
- 为了解陕西省屠宰生猪猪圆环病毒2型(PCV2)的感染及其遗传变异情况,通过PCR方法,对2018—2019年采自陕西省咸阳和杨凌地区生猪屠宰企业的300份血样进行PCV2病原学检测,并扩增部分阳性样品的开放阅读框2(ORF2)基因,同时进行序列比对和遗传变异分析。试验结果显示,38份血样PCV2病原学检测为阳性,阳性率12.67%;选取的20份阳性血样,扩增ORF2基因并比对分析,结果11个属于PCV2b亚型(55%),9个属于PCV2d亚型(45%),说明PCV2b亚型和PCV2d亚型是陕西省屠宰生猪中PCV2的主要流行毒株。本研究结果有利于掌握陕西省屠宰生猪中PCV2毒株流行情况,从而为PCV2感染的针对性防治提供依据。
- 罗弼豪徐浩罗丽华范昱鑫杨卓霖王月婷季天润康煜坤韩雪英郭抗抗
- 关键词：屠宰生猪猪圆环病毒2型ORF2基因遗传变异分析
- 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析被引量：2
- 2023年
- 【目的】制备携带猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗原表位的铁蛋白纳米颗粒,并评价其免疫原性,为PEDV的防控提供新的候选亚单位疫苗。【方法】将PEDV纤突蛋白S的COE和S1D区域设计成串联表位S1CD并进行密码子优化和合成,构建单独表达S1CD蛋白的重组质粒pET28a-S1CD及融合表达S1CD蛋白和铁蛋白亚基的重组质粒pET28a-S1CD-Ferritin,并在大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。使用SDS-PAGE和Western blotting方法验证S1CD、S1CD-Ferritin蛋白在大肠杆菌内是否正确表达,并通过透射电镜观察其形态结构。将纯化的S1CD-Ferritin蛋白免疫小鼠,同时以纯化的S1CD蛋白和PBS为对照,采用间接ELISA方法检测各组小鼠血清的S特异性抗体水平和γ-干扰素(IFN-γ)含量,通过中和试验测定中和抗体水平,分析重组蛋白在小鼠体内的免疫原性。【结果】成功构建了重组质粒pET28a-S1CD和pET28a-S1CD-Ferritin。SDS-PAGE结果显示,高效表达出了S1CD和S1CD-Ferritin重组蛋白,大小分别约为22和39 ku,均以包涵体形式存在。Western blotting鉴定结果显示,S1CD和S1CD-Ferritin蛋白均与PEDV阳性血清发生特异性反应,表明原核表达得到的S1CD和S1CD-Ferritin重组蛋白具备良好的反应原性。透射电镜结果显示,纯化后的S1CD-Ferritin蛋白可形成大小均一、粒径为12~20 nm的球形颗粒,表明S1CD-Ferritin蛋白已成功组装为纳米颗粒。血清抗体检测结果显示,首次免疫7 d后,S1CD-Ferritin蛋白免疫组抗体水平迅速提高,显著高于S1CD蛋白免疫组(P<0.05);首次免疫28 d后,S1CD-Ferritin蛋白免疫组的中和抗体水平及IFN-γ含量均显著高于S1CD蛋白免疫组(P<0.05)。【结论】融合铁蛋白的PEDV抗原表位在大肠杆菌中得到高效表达,并能自组装形成纳米颗粒,显著增强目的抗原的免疫原性,为研究新的PEDV亚单位疫苗拓宽了研究思路。
- 刘家兴韩雪英张鑫茹邓嘉昕姚伦广刘阳坤
- 关键词：铁蛋白免疫原性
- 猪流行性腹泻病毒纤突蛋白S1抗原表位的串联表达及免疫原性分析
- 2023年
- 为了获得猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)纤突蛋白S1抗原表位的串联重组蛋白并评价其免疫原性,试验将S1蛋白的抗原表位COE和S1D连接起来组成串联表位S1CD,合成相应的基因片段后克隆至转移载体pFastBac1上,然后转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑和PCR扩增筛选重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-S1CD,再转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒,采用间接免疫荧光试验和Western-blot检测方法鉴定重组蛋白S1CD的表达情况。将小鼠随机均分为S1CD蛋白组、PEDV灭活疫苗组和PBS组,分别经背部皮下多点注射重组蛋白S1CD、PEDV HeN170821灭活病毒和PBS与弗氏佐剂等体积混合制成的抗原,检测特异性IgG抗体水平及白细胞介素-4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)含量以评价重组蛋白S1CD的免疫原性。结果表明:重组蛋白S1CD成功在Sf9昆虫细胞中表达,并能与鼠抗His单克隆抗体和PEDV阳性血清发生特异性反应;首次免疫后第28天,S1CD蛋白组的特异性IgG抗体水平极显著高于PBS组(P<0.01);首次免疫后第42天,S1CD蛋白组的特异性IgG抗体水平及IL-4和IFN-γ含量均极显著高于PBS组(P<0.01)。说明利用杆状病毒表达系统表达的重组蛋白S1CD具有良好的免疫原性。
- 刘阳坤王国川韩雪英冷超粮姚伦广
- 关键词：S1蛋白抗原表位免疫原性
- GⅡ.17型诺如病毒样颗粒的制备及鉴定被引量：1
- 2022年
- [背景]诺如病毒(Norovirus,NoV)是引发全球人类急性胃肠炎的主要食源性致病原,具有广泛的遗传多样性,其中GⅡ.17型是亚洲地区的优势流行株,危害最为严重。研究表明,通过基因工程技术制备的诺如病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)具有良好的免疫保护作用,是目前NoV疫苗研发的主要思路。[目的]利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统制备GⅡ.17型诺如病毒的VLP,为GⅡ.17型NoV疫苗的研发奠定基础。[方法]合成GⅡ.17型NoV衣壳蛋白VP1的基因并克隆入pET28a-MsyB原核表达质粒中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,通过烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶去除融合标签,利用His-Tag镍柱纯化获得天然VP1蛋白,利用SDS-PAGE、Western Blot和透射电镜对纯化后的VP1蛋白反应原性及其形成的结构进行初步鉴定。[结果]MsyB-VP1融合蛋白能够以可溶形式大量表达,其最适表达条件为:IPTG浓度0.8 mmol/L,37℃诱导8 h;TEV蛋白酶酶切后的VP1纯化蛋白能够与鼠抗GⅡ.17型NoV VP1多克隆抗体特异性结合,并能够自组装形成直径约为40 nm的病毒样颗粒。[结论]利用原核表达系统成功制备了GⅡ.17型诺如病毒VLP,有望成为GⅡ.17型诺如病毒的候选疫苗。
- 王竹叶韩雪英王国川黄克李娜姚伦广刘阳坤
- 关键词：诺如病毒病毒样颗粒原核表达
