罗嫚
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金贵州省农业攻关项目贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 家蝇GNBP3基因克隆及感染白色念珠菌后的表达被引量：4
- 2017年
- 对家蝇GNBP3基因进行克隆及生物信息学分析,并对该基因在感染白色念珠菌Candida albicans后的表达情况进行研究。从构建的家蝇Musca domestica幼虫c DNA质粒文库中筛选到GNBP3基因,克隆并运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。白色念珠菌注射感染家蝇幼虫并收集标本,逆转录,通过荧光定量PCR检测感染样本中GNBP3基因的表达情况,结果进行统计学分析。研究结果表明,GNBP3基因ORF全长1473 bp,编码490个氨基酸,理论分子量为55.8 k Da,等电点为6.85;感染后不同时间点,感染组与对照组比较,在3 h、12 h、36 h、48 h GNBP3 mRNA的表达明显增高,两组比较有显著性差异(P<0.05),而24 h表达差异性最小;感染后不同组织中感染组与对照组比较,3 h和12 h时,在体壁、血淋巴、脂肪体中的表达量升高,具有显著性差异(P<0.05);24 h时,在血淋巴中的表达量较对照组高,而在唾液腺和脂肪体中的表达量呈下降趋势,均具有显著性差异(P<0.05);48 h,在血淋巴和脂肪体中表达量较对照组高,在中肠的表达量较对照组低,均具有显著性差异(P<0.01)。成功克隆GNBP3基因且在家蝇感染白色念珠菌后GNBP3的表达水平随时间的推移呈现先升高后降低再升高的趋势,在各组织中以在免疫组织(血淋巴、脂肪体)中的表达显著增高,推测其在真菌识别过程中发挥潜在作用。
- 胡亚罗嫚王宇王涛尚小丽张迎春修江帆吴建伟
- 关键词：实时荧光定量PCRMRNA水平家蝇
- 家蝇幼虫围食膜蛋白(MdPM-17)的基因克隆鉴定及其特性研究
- 目的： 研究家蝇幼虫围食膜蛋白 MdPM-17分子特点及生物学特性。 方法: 用RT-PCR方法从家蝇cDNA中获取MdPM-17基因，运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白序列进行预测和分析;构建原核表达质粒pE...
- 罗嫚
- 关键词：家蝇免疫调控几丁质原核表达质粒
- 白假丝酵母菌侵染家蝇幼虫中肠转录组学研究
- 目的：利用家蝇与人类机会性致病真菌白假丝酵母菌(Candida albicans)的互作探讨宿主与病原体的相互作用，筛选家蝇(Musca domestica)幼虫中肠应对白假丝酵母菌侵染前后的免疫应答变化，为深入研究家蝇...
- 王宇罗嫚胡亚王涛吴建伟
- 关键词：家蝇白假丝酵母菌转录组
- 家蝇肽聚糖识别蛋白(PGRP-SA)的克隆表达及细菌结合研究被引量：5
- 2016年
- 对家蝇PGRP-SA基因进行克隆表达以及研究其重组蛋白与细菌结合能力。从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫cDNA质粒文库中筛选到PGRP-SA基因,以cDNA质粒为模板设计引物,通过PCR扩增,获得PGRP-SA基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建pET-28a(+)-PGRP-SA重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达及蛋白纯化。利用半定量RT-PCR检测PGRP-SA在家蝇3龄幼虫不同组织中的表达量差异。PGRP-SA重组蛋白进行微生物结合实验。结果表明,PGRP-SA基因ORF全长615 bp,编码204个氨基酸,理论分子量22.8 k D,等电点9.11,具有保守的PGRP结构域。成功构建了pET-28a(+)-PGRP-SA重组质粒,蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中获得表达,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,利用Western blot检测证明纯化蛋白与预期大小相符。PGRP-SA在家蝇3龄幼虫血淋巴、脂肪体、前肠、中肠、气管、马氏管都有表达,血淋巴组织中表达量最高,后肠无表达,由此说明PGRP-SA基因的表达具有一定的组织性。PGRP-SA重组蛋白能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合,与白色念珠菌不能结合。成功表达及纯化家蝇PGRP-SA蛋白,证实家蝇PGRP-SA能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合。
- 罗嫚王宇胡亚修江帆王涛彭建尚小丽吴建伟
- 关键词：家蝇先天免疫肽聚糖识别蛋白原核表达
