张静远
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- PK-15细胞中与CSFV感染相关的microRNAs筛选及miR-214的功能研究被引量：2
- 2018年
- 【目的】利用制作的猪的miRNA表达谱芯片筛选猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)感染PK-15细胞后表达有差异的miRNA,并进一步探讨其中表达差异较明显的miRNA的作用和功能,从miRNA的角度探究CSFV的致病机制,为猪瘟(classical swine fever,CSF)的防控提供新依据。【方法】为了研究CSFV感染PK-15细胞后miRNA表达的变化情况,根据miRBase version 19.0数据库中326条猪的miRNA合成探针,采用原位合成技术制作表达谱芯片,筛选得到CSFV感染PK-15细胞后表达有差异的miRNA。挑选CSFV感染PK-15细胞后表达差异最明显的miR-214作为进一步研究对象,研究miR-214在CSFV感染过程中的功能和作用。CSFV感染PK-15细胞后,用荧光定量PCR检测miR-214的mRNA表达水平。为了进一步研究miR-214对CSFV感染的影响,合成miR-214模拟物及抑制物,并分别转染PK-15细胞,转染后24 h感染CSFV,感染后48h用荧光定量PCR检测CSFV的基因拷贝数,用间接免疫荧光方法检测CSFV的病毒滴度。为了进一步探究miR-214参与调控CSFV复制的机制,通过生物信息学软件预测miR-214参与调控CSFV复制的靶蛋白,并用荧光素酶报告基因系统进一步确证miR-214能够靶向作用于凋亡通路中重要分子TNFR1相关的死亡区域蛋白(TNF Receptor-Associated Death Domain,TRADD),因此猜测miR-214通过影响靶蛋白TRADD的表达水平从而影响PK-15细胞凋亡,将miR-214模拟物及抑制物分别转染PK-15细胞,转染后24 h感染CSFV,同步设立不感染CSFV的细胞对照,感染后48 h用荧光定量PCR和Western blot分别检测TRADD的mRNA和蛋白表达量的变化,同时用流式细胞术检测miR-214对CSFV感染的PK-15细胞凋亡的影响。【结果】CSFV感染PK-15细胞后,通过表达谱芯片技术筛选得到69条表达有差异的miRNA,其中miR-214表达量上调且差异最明显。qRT-PCR结果显示,CSFV感染PK-15细胞后miR-214的mRNA表达量上调,验证了表达谱芯片的结果。将miR-214模拟物转�
- 邓少锋叶佐东范双旗陈金顶张静远朱梦娇赵明秋
- 关键词：猪瘟病毒MIRNATRADD凋亡
- 食品动物源沙门菌oqxAB基因的检测及水平传播机制研究被引量：6
- 2011年
- 为了调查食品动物源沙门菌Salmonella oqxAB耐药基因的流行情况和水平传播机制,采用二倍琼脂稀释法测定临床分离的31株沙门菌对常用抗菌药物的敏感性,PCR方法特异扩增耐药基因oqxAB,并对扩增产物克隆测序.通过接合转移试验验证oqxAB基因的水平传播.试验结果表明,31株沙门菌对氨苄霉素的耐药率最高,达64.5%,对氨基糖苷类、氯霉素类、四环素类、氟喹诺酮类的耐药率介于42%～55%之间,对头孢菌素类的耐药率最低,约为20%.31株沙门菌中共检测到12株含有oqxAB基因,检出率为39%.以J53AziR为受体菌进行oqxAB基因阳性菌的质粒接合转移试验,结果得到5株oqxAB基因接合子.接合子的药敏结果显示,除了氟喹诺酮类药物的最低抑菌浓度(MIC)升高外,对链霉素、四环素及氯霉素的耐药性也有不同程度的增加,说明介导链霉素、四环素及氯霉素的耐药基因可能与oqxAB基因随质粒一起转移.
- 刘继宋立魏飞龙汤电张静远张小华李健蒋红霞
- 关键词：沙门菌最低抑菌浓度质粒
- 猪瘟病毒新型诊断技术的建立与应用
- 猪瘟病毒(CSFV)是引起猪瘟(CSF)的主要病原,CSF是一种具有高度传染性的病毒性疾病,给世界养殖业带来了的重大经济损失.因此,建立一种快速、简便、准确的诊断方法用于猪瘟病毒的诊断与防控是十分必要的.传统用于猪瘟的诊...
- 张静远范双旗邓少锋朱梦娇赵明秋陈金顶
- 关键词：猪瘟
- PK-15细胞中与CSFV感染相关microRNAs的初步筛选及miR-214和miR-125b的功能研究
- 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪重大烈性传染病,具有急性、热性、高度接触性等特点,常给养猪业造成巨大的经济...
- 叶佐东邓少锋张静远朱梦娇范双旗赵明秋陈金顶
- 关键词：猪瘟基因功能
