目的探索成牙骨质细胞OCCM-30中骨形态发生蛋白2(BMP2)对硬化蛋白(SOST)表达的调控机制。方法用2种质量浓度的BMP2(50、100 ng·mL^(-1))处理成牙骨质OCCM-30细胞3、5、7 d,相同体积的PBS液为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法检测SOST m RNA和蛋白的表达情况。将OCCM-30细胞分为5组:空白对照组、BMP2组、BMP2+dorsomorphin组、BMP2+SB202190组、BMP2+PD98059组,根据分组分别加入100 ng·mL^(-1)的BMP2和相应的试剂共培养,于3、5 d时检测SOST m RNA和蛋白的表达情况。结果 100 ng·mL^(-1)BMP2对SOST表达的上调作用强于50 ng·mL^(-1) BMP2,且有时间依赖性(P<0.05)。BMP2+dorsomorphin组、BMP2+SB202190组、BMP2+PD98059组的SOST m RNA水平和蛋白质水平均降低,其中BMP2+dorsomorphin组降低最明显(P<0.05)。结论成牙骨质细胞中BMP2主要是通过Smad信号通路介导上调SOST的表达。
背景:有研究表明骨形态发生蛋白9能促进多种干细胞的成骨分化,但其是否具有诱导牙囊细胞成骨向分化的能力尚不清楚。目的:探讨骨形态发生蛋白9对大鼠牙囊细胞成骨分化的诱导作用。方法:以纯化的第3代大鼠牙囊细胞为研究对象,感染骨形态发生蛋白9腺病毒后,检测牙囊细胞中碱性磷酸酶活性、钙盐沉积以及矿化相关因子基因和蛋白的表达变化。结果与结论:感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞碱性磷酸酶活性持续增强,钙盐沉积明显增强。Real time PCR检测结果显示感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞中矿化相关因子碱性磷酸酶、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥蛋白和核心结合因子mR NA表达增强。Western blot检测结果显示感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞中骨桥蛋白的表达增强。以上结果表明骨形态发生蛋白9可诱导牙囊细胞向成骨方向分化。
目的探讨在机械张应力刺激下细胞外信号调节激酶(ERK1/2)对成牙骨质细胞骨保护素(OPG)和破骨细胞分化因子(RANKL)表达的影响。方法利用Flexcell FX4000T张应力加载系统和ERK1/2特异性抑制剂PD98059,以体外培养的成牙骨质细胞样细胞OCCM30为研究对象,将细胞随机分为4组:A组(不加力不加抑制剂组);B组(不加力加抑制剂组);C组(加力不加抑制剂组);D组(加力加抑制剂组)。采用Western blotting检测张应力加载5、15、30、60min4个时间点的ERK1/2磷酸化水平,荧光定量PCR检测张应力加载12h时的OPG和RANKL m RNA表达水平。结果机械张应力可迅速激活C组成牙骨质细胞内的ERK1/2信号通路,且在5、15、30min时P-ERK1/2水平明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),至60min时恢复至与A组相近的水平;在抑制剂作用下,B、D组P-ERK1/2水平显著降低。张应力作用下细胞OPG m RNA表达减弱,RANKL m RNA表达增强,RANKL/OPG比值增大,而在抑制剂与机械张应力双重作用下,细胞OPG m RNA表达增强,RANKL m RNA表达减弱,RANKL/OPG比值减小,但仍高于抑制剂作用组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ERK1/2信号通路参与张应力对成牙骨质细胞OPG、RANKL表达的调控,但不是唯一激活通路,可能有其他信号通路共同参与对OPG、RANKL基因表达的调控。
