陈德浩
- 作品数：3 被引量：26H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 绵羊肺炎支原体P71蛋白分段表达及其间接ELISA方法的建立被引量：9
- 2015年
- 为研究绵羊肺炎支原体(MO)P71蛋白免疫学相关功能及建立MO的快速检测方法,本研究采用PCR扩增MO P71基因片段,测序后利用生物学软件分析P71蛋白的抗原表位,选取抗原表位富集的3个基因片段P71-1(1 bp^516 bp)、P71-2(505 bp^1 338 bp)和P71-3(1 327 bp^1 905 bp)分别克隆至原核表达载体p ET-32a中进行表达。分别利用western blot和间接ELISA方法对表达产物的免疫原性、反应原性进行鉴定,以筛选的优势抗原蛋白为诊断抗原,通过对反应条件的优化,建立检测MO抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组蛋白P71-3产生的抗体效价最高,与MO阳性血清的结合能力最强,阴阳性临界值为:OD450nm值=0.292。该方法与口蹄疫、小反刍兽疫、副结核、羊布鲁菌病、结核阳性血清均无交叉反应,具有极强的特异性。组内组间变异系数均小于10%,重复性较好。利用该方法与间接血凝试验对150份临床血清样品进行检测,结果显示,两者符合率为96.67%。本研究为进一步研制MO ELISA检测试剂盒奠定了基础。
- 黄海碧郑佳琪王仁超王晓晖陈德浩王灵芮郭逸贤郝永清
- 关键词：绵羊肺炎支原体抗原性分析ELISA
- 绵羊气管上皮细胞的分离培养及绵羊肺炎支原体对其的吸附被引量：3
- 2015年
- 为建立简便、高效、稳定的绵羊气管上皮细胞的体外培养及鉴定的方法,并在所培养的细胞上研究绵羊肺炎支原体侵染模型,本研究利用链蛋白酶冷消化法对绵羊气管上皮细胞进行体外分离,通过差速贴壁法纯化气管上皮细胞并进行传代后用液氮保存,细胞复苏后通过测定生长曲线、上皮细胞骨架蛋白角蛋白8和18以及对染色体与微生物的检测等对所培养细胞进行鉴定,并将鉴定纯化的气管上皮细胞用绵羊肺炎支原体进行侵染。结果显示,成功培养出绵羊气管上皮细胞,纯化的细胞在显微镜下排列紧密,形态均一,呈鹅卵石铺路样。细胞生长曲线呈"S"型,分子生物学手段和增菌试验未检测到气管上皮细胞中含有微生物污染,通过细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8、18,染色体核型数目为2n=54。绵羊肺炎支原体能黏附于分离纯化的绵羊支气管上皮细胞,为进一步研究支原体侵染细胞的机制等奠定了基础。
- 黄海碧郑佳琪王晓晖陈德浩张超刘利郝永清
- 关键词：绵羊气管上皮细胞绵羊肺炎支原体
- 内蒙古地区奶牛病毒性腹泻/黏膜病血清流行病学调查被引量：14
- 2014年
- 应用ELLSA试验对来自内蒙古地区17个大﹑中﹑小型奶牛场的2 391份牛血清样品进行了牛病毒性腹泻/黏膜病抗体检测,并对其中222份抗体阴性牛应用ELISA试验进行牛病毒性腹泻/黏膜病的抗原检测。结果表明:17个奶牛场均检出BVDV抗体阳性,共检出阳性血清2 125份,阳性率最高达100%,最低为46.8%,平均为88.9%。对14个奶牛场进行了BVDV抗原检测,在5个奶牛场检出BVDV抗原阳性,阳性率为3.6%(8/222)。表明内蒙古地区奶牛场普遍存在牛病毒性腹泻/黏膜病感染,感染率较高,并且牛群中存在持续性感染(PI)牛。
- 李智勇石顺利王艳杰陈德浩李平安关平原
- 关键词：牛病毒性腹泻流行病学调查
