李璐
- 作品数：3 被引量：9H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 梅花鹿VEGF基因的克隆及其在鹿茸顶端组织的表达被引量：4
- 2017年
- 为了得到VEGF成熟肽基因,利用Trizol试剂法提取鹿茸顶端组织总RNA,反转录形成c DNA。根据Gen Bank已发表的相关基因序列设计1对特异性引物,并克隆VEGF成熟肽基因,再利用免疫组化法检测VEGF基因在鹿茸顶端不同组织的表达水平。结果表明:成功获得梅花鹿VEGF成熟肽基因,该基因长495 bp,共编码164个氨基酸;经Blast同源性分析,结果显示与牛、羊、猪的核苷酸序列的同源性分别为98.79%、97.98%、96.36%;经DNAMAN软件比对,其氨基酸序列的同源性分别为98.78%、97.56%、96.95%。免疫组化法结果显示,VEGF在茸皮层、间充质层和软骨层中均有表达,其中在软骨层中表达水平较高。
- 韩香玉吴炎李璐闫语多胡薇
- 关键词：梅花鹿鹿茸血管内皮生长因子克隆免疫组化
- 鹿茸顶端组织miRNA芯片制备及差异表达miRNA的筛选被引量：3
- 2016年
- 为制备梅花鹿鹿茸顶端间充质组织及软骨组织miRNA芯片,分离鹿茸间充质和软骨组织细胞,利用TRIzol试剂法分别提取细胞的总RNA,并进行miRNA生物素标记,将标记的小RNA在miRNA芯片上进行杂交反应,再进行芯片扫描及数据处理,应用相对荧光定量Real-time PCR法验证部分miRNA芯片结果的可靠性。研究结果显示:筛选得到鹿茸间充质和软骨组织miRNA差异表达谱。间充质部位存在的miRNA为289个,软骨部位存在的miRNA条数为304条。其中间充质组织中117个miRNA表达上调,71个miRNA表达下调;软骨组织中97个miRNA表达上调,87个miRNA表达下调;两个组织中共同存在且具有显著差异性表达的miRNA为158个。Real-time PCR法验证结果显示,相对于间充质细胞,miR-1、miR-18a、miR-18b、miR-19a、miR-19b、miR-20b和miR-let-7f的表达均上调;而miR-99b、miR-130b及miR-184的表达均下调,与芯片结果一致。
- 崔东明孟星宇李婷田玉华李沐李璐胡薇
- 关键词：鹿茸间充质软骨MIRNA芯片
- MiRNA-93-5p对VEGF的转录调控及其与梅花鹿茸细胞增殖的关系被引量：3
- 2014年
- 为了探讨miRNA-93-5p对梅花鹿血管内皮生长因子(VEGF)的转录调控作用及其与鹿茸细胞生长的关系,分离了鹿茸顶端软骨组织细胞,利用Trizol试剂法提取细胞总RNA,反转录合成c DNA。根据Gen Bank已发表的相关序列设计梅花鹿VEGF基因的3'端非编码区部分序列(3'UTR)特异引物并进行克隆,构建VEGF基因的3'UTR野生型及其突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测。再将人工合成的miRNA-93-5p模拟物转染鹿茸软骨细胞,MTT法检测鹿茸细胞体外增殖的变化;Western blotting分析VEGF蛋白的表达丰度。结果表明:成功获得了鹿茸组织VEGF基因的3'UTR序列,野生型序列长度为356 bp,突变体长度为336bp。荧光素酶活性检测结果表明,转染野生型质粒组细胞荧光素酶活性降低,而转染突变体组细胞荧光素酶活性无明显变化。MTT法和Western blotting结果显示,鹿茸细胞的体外增殖受到抑制,VEGF蛋白的表达水平下降,且呈时间依赖性。
- 李璐李婷李沐吴炎齐琳崔东明胡薇
- 关键词：血管内皮生长因子转录调控细胞增殖
