李敬
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：徐州师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- β分泌酶原核表达载体的构建、表达及融合蛋白纯化
- 2009年
- 目的构建小鼠β分泌酶原核表达载体并诱导其表达和纯化,为进一步研究β分泌酶的作用奠定基础。方法根据基因文库中小鼠β分泌酶基因的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增到β分泌酶的cDNA片段,克隆进原核表达载体pET-28 a中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),测序鉴定后,通过IPTG诱导表达出目的蛋白,经亲合层析纯化。结果从小鼠的脑组织RNA中扩增出特异的β分泌酶基因片段长1 506 bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实重组载体pET28 a-BACE构建正确,表达融合蛋白分子量约为55 kD,经镍离子亲合柱层析纯化获得电泳级纯度的目的蛋白。结论在大肠杆菌中获得了小鼠β分泌酶的高效表达,为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础。
- 朱爱华李敬陆军钱进郑元林
- 关键词：Β分泌酶大肠杆菌融合蛋白
