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刘红军
刘红军
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
供职机构:
北京放射与辐射医学研究所
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发文基金:
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
生物学
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合作作者
段海峰
北京放射与辐射医学研究所
吴祖泽
北京放射与辐射医学研究所
劳妙芬
北京放射与辐射医学研究所
毕建进
北京放射与辐射医学研究所
肖凤君
北京放射与辐射医学研究所
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作者
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张庆林
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吴祖泽
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刘红军
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段海峰
传媒
1篇
生物技术通讯
年份
1篇
2006
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重组质粒pUDKH的质量分析
被引量:2
2006年
目的:分析研究pUDKH的质量。pUDKH是由本实验室构建的携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的真核表达质粒,具有治疗肢体动脉闭塞病的应用潜能。方法:用光密度法分析pUDKH的浓度及纯度;用0.8%琼脂糖凝胶电泳分析超螺旋pUDKH比例及RNA;以地高辛标记的核酸探针固相斑点杂交法测定残留宿主DNA含量;用酶联免疫法测定残留宿主菌蛋白;以4组限制性内切酶分析一致性;PCR扩增目的基因片段;抑菌圈测定板测定残余抗生素;用鲎试剂检测细菌内毒素;对CHO细胞进行基因转染;ELISA检测上清HGF表达量;用Transwells法分析表达的上清液诱导ECV304细胞迁移数。结果:03批次pUDKH的浓度为1.97mg/mL,D260nm/D280nm值为1.84,超螺旋pUDKH比例为95.5%;电泳图谱中未见RNA;残留宿主DNA含量低于质粒DNA的0.2%;菌体蛋白质残留含量低于质粒DNA的0.1%;限制性酶切图谱与自行制备的对照品一致;PCR扩增到HGF基因片段,长约2.2kb;未见残余抗生素(卡那霉素)抑菌圈;细菌内毒素≤0.03125EU/mL;转染的CHO细胞上清HGF表达量为39.32ng/mL;表达的上清诱导ECV304细胞迁移数高于对照组2倍。结论:03批次pUDKH的质量符合药学规格。
张庆林
肖凤君
毕建进
刘红军
段海峰
劳妙芬
吴祖泽
关键词:
重组质粒
基因治疗
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