钱志浩
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 供职机构：常熟理工学院生物与食品工程学院苏州市食品生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：常熟市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程更多>>
- 重组融合蛋白大肠杆菌不对称合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸被引量：3
- 2017年
- 将来自于Lactobacillus plantarum的突变D-乳酸脱氢酶(D-LDH^(Y52V))和Candida boidinii的甲酸脱氢酶(FDH)进行融合,重组成双功能融合蛋白,为生物法合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(D-PLA)提供新的方法。利用重叠延伸PCR技术,将对底物苯丙酮酸(PPA)亲合力更高的突变蛋白D-LDH^(Y52V)与FDH通过连接肽(Gly4Ser)3融合,将融合基因克隆至表达载体p ET-28a(+),并转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达。SDS-PAGE电泳分析结果表明,融合蛋白分子质量为79.7 k Da,在重组菌中获得了正确表达;酶活性测定结果表明,融合蛋白具有D-LDH和FDH的双重生物学活性。在不对称转化PPA合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(DPLA)的应用中,融合蛋白体系比D-LDH^(Y52V)单独表达体系的D-PLA产量提高了40.71%。通过5 h底物分批补加发酵,D-PLA产量为17.34 g/L,底物转化率为77.64%,生产强度3.47 g/(L·h)。双功能融合蛋白增强了辅酶再生的效率,有效促进了(R)-2-羟基-3-苯基丙酸的不对称合成。
- 朱益波蒋卓越郭倩郑青云林容天钱志浩齐斌王立梅
- 关键词：甲酸脱氢酶融合蛋白辅酶再生
