程德杰
- 作品数：6 被引量：11H指数：3
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小麦黄花叶病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备被引量：1
- 2015年
- 通过RT-PCR方法扩增获得小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的衣壳蛋白(CP)基因,将其连接原核表达载体p EHISTEV,并将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,可以表达38 k D的融合蛋白。通过切胶回收的方法收集目的蛋白,免疫新西兰长耳兔,制备WYMV CP的多克隆抗体。间接ELISA测定该抗血清效价为1∶2 048,Western blotting分析表明该血清可以与病株中CP发生特异性反应,而与健康植株汁液无反应。该血清为WYMV的检测及CP功能的研究奠定了基础。
- 唐伟程德杰魏娇孔凡惠李向东于金凤
- 关键词：小麦黄花叶病毒外壳蛋白原核表达抗血清
- 甘蔗花叶病毒2个山东分离物的全基因组序列分析被引量：5
- 2017年
- 甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮花叶病的主要病毒。本文从山东泰安采集到2个表现矮花叶症状玉米样品的分离物(命名为DWK1和DWK2),通过RT-PCR扩增全基因组片段并测定了其序列(GenBank登录号分别为KU171814和KU171815)。序列分析结果表明,DWK1和DWK2基因组全长分别为9 575和9 576个核苷酸(nucleotides,nt),开放阅读框均为9 192 nt,编码3 063个氨基酸的多聚蛋白。DWK1和DWK2的全基因组核苷酸一致率为81.7%,DWK1与山西分离物SX(AY569692)的核苷酸一致率最高,为90.9%;DWK2与河北分离物BD8(JN021933)核苷酸一致率最高,达99.4%。二者在系统进化树中分别被聚类到Ⅰ组和Ⅳ组。重组分析发现,DWK1是HN(AF494510)、Guangdong(AJ310105)和BD8 3个分离物的重组体。选择压力分析表明,SCMV 11个蛋白的dN/dS值都小于1,均处于负选择,但在P1、P3和CP中存在正选择位点。本研究结果可为甘蔗花叶病毒株系的监测及防控提供理论指导。
- 程德杰闫志勇黄显德田延平原雪峰李向东
- 关键词：全基因组序列系统发育分析甘蔗花叶病毒
- 小麦黄花叶病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备
- 通过RT-PCR的方法扩增获得小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus,WYMV）的衣壳蛋白（CP）基因,并将其连接原核表达载体pEHISTEV。将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta,通过IP...
- 唐伟程德杰魏娇孔凡惠李向东于金凤
- 关键词：小麦黄花叶病毒外壳蛋白原核表达抗血清
- 文献传递
- 番木瓜环斑病毒西瓜株系侵染性克隆的构建及应用
- 利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR获得了番木瓜环斑病毒西瓜株系山东分离物(PRSV-SD)的全基因组序列。PRSV-SD基因组(GenBank登录号为MF085000)全长10 337个核苷酸(nuc...
- 黄显德王玉程德杰刘锦闫志勇田延平李向东
- 关键词：全基因组序列
- 文献传递
- 甘蔗花叶病毒第Ⅳ组分离物RT-PCR检测体系的建立及应用被引量：3
- 2017年
- 甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮化叶病的主要病毒。根据其基因组序列,SCMV可以分为4个组,其中第Ⅳ组分离物属于新出现的强毒株系。为了快速检测SCMV尤其是Ⅳ组分离物的发生情况,我们针对SCMV Ⅰ-Ⅳ组及Ⅳ组分离物设计了6对引物,从中筛选出特异性最强的2对引物(Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R),进行PCR体系的优化。优化后的PCR体系为:退火温度51℃,d NTP终浓度为0.1 mM,引物终浓度为0.20μM,Taq DNA聚合酶终浓度为0.015 U·μL^(-1)。利用该体系,引物对Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R均能够从50 ng感病叶片或0.05 ng病毒RNA中检测出SCMV。通过优化两对引物浓度比例建立了能同时检测SCMV所有分离物及第四组分离物的双重PCR体系。利用该体系从山东、河南及云南均检测出SCMV第Ⅳ组分离物的发生。本研究为SCMV尤其是SCMV第Ⅳ组分离物的快速检测提供了技术支持。
- 闫志勇程德杰房乐许小洁田延平贾曦李向东
- 关键词：甘蔗花叶病毒反转录-聚合酶链式反应
- 马铃薯Y病毒HC-Pro第182位赖氨酸残基参与引起烟草叶脉坏死被引量：3
- 2021年
- 马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)是侵染烟草的最重要病毒之一。不同PVY株系侵染烟草可引起不同症状,有些PVY株系可引起烟草叶脉坏死,严重影响烟草的产量和品质。PVY A12分离物属于NTN-NW株系,但侵染珊西烟(Nicotiana tabacum cv. Xanthi)不能引起叶脉坏死。分析发现,PVY分离物A12 HC-Pro第182和245位的氨基酸均为精氨酸(R),而能引起叶脉坏死的其他NTN-NW分离物HC-Pro的这2个位点均为赖氨酸(K)。PVY坏死株系N605的HC-Pro第182位和245位氨基酸也均为K。本研究通过定点突变,将N605侵染性克隆PVY^(N605)-GFP HC-Pro第245位残基K突变为R,突变体仍然能够引起叶脉坏死,而将其HC-Pro第182位残基K突变为R,突变体不能引起叶脉坏死。Western blot检测发现,2个突变体与野生型病毒CP蛋白在珊西烟中的表达水平没有明显差异。沉默抑制实验结果显示,2个突变体和野生型的HC-Pro抑制RNA沉默能力没有发生变化。初步确定PVY^(N605)-GFP HC-Pro第182残基K是引起叶脉坏死的关键氨基酸,推测PVY A12分离物不能引起烟草叶脉坏死的原因是其HC-Pro第182残基R引起的。
- 程林发董文浩张凤桐程德杰耿超田延平白艳菊白艳菊
- 关键词：马铃薯Y病毒
