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人星状病毒非结构蛋白C末端nsP1a/4蛋白6种删除突变体的构建与表达分析被引量：2: 2013年; 星状病毒(Human astrovirus,HAstV)是通过引起小肠上皮细胞凋亡从而导致婴幼儿腹泻的重要病原体。课题组前期研究表明HAstV非结构蛋白nsP1aC末端蛋白nsP1a/4是诱导凋亡的主要功能性蛋白,可能含有与凋亡相关的重要结构域。为了探索nsP1a/4蛋白中的凋亡结构域,本研究采用绿色荧光蛋白真核表达载体,根据nsP1a/4蛋白功能性结构域的位置,选择不同的删除位点,构建nsP1a/4蛋白及不同结构域删除的nsP1a/4蛋白突变体,并将其转染BHK21细胞,在转染的24～72h检测重组蛋白在细胞内的表达并进行初步分析。结果显示,24h后荧光显微镜下可观察到融合nsP1a/4蛋白和其突变体的绿色荧光。Western blot分析结果显示7种融合蛋白均能在体外细胞中高效表达,72h表达量明显高于48h。这些结果表明我们构建的nsP1a/4蛋白及其删除突变体可在BHK21细胞中表达,可用于HAstV非结构蛋白nsP1a/4的凋亡结构域研究,从而为进一步研究HAstV分子致病机制提供研究平台。; 赵微牛科赵健金一鸣隋婷婷王文; 关键词：星状病毒非结构蛋白融合蛋白凋亡机制

舌鳞癌侵袭转移相关蛋白CD63-LEL结构域表达及纯化: 2016年; 目的构建p ET-29a-CD63-LEL重组质粒,诱导蛋白表达,鉴定表达产物并纯化蛋白,为后续研究CD63-LEL蛋白对人舌鳞癌侵袭转移的影响奠定基础。方法根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)中查询到的CD63-LEL基因序列,运用RT-PCR技术从TCA-8113细胞中获得CD63-LEL的c DNA序列,经PCR、双酶切及测序确定获得p ET-29a-CD63-LEL重组载体后,转化至大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)感受态中,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-Dgalactoside,IPTG)诱导表达,运用镍柱亲和层析法纯化获得p ET-29a-CD63-LEL融合蛋白。结果成功构建了p ET-29aCD63-LEL重组质粒,经SDS-PAGE凝胶电泳检测:在37℃,1 mmol/L IPTG诱导12 h p ET-29a-CD63-LEL蛋白表达量高;在咪唑浓度为MCAC-80/100/200/500条件下可洗脱目的蛋白,Western blot检测Ni-NTA agarose纯化蛋白大小位于26 k U和35 k U处。结论在大肠埃希菌中获得了p ET-29a-CD63-LEL蛋白的大量表达,经镍柱亲和层析可得到较纯的p ET-29aCD63-LEL蛋白。; 侯美玲梁雪雪谭李倩刘文慧王文赵微李新; 关键词：舌鳞癌蛋白表达

锦州地区腹泻住院儿童星状病毒检测及同源性分析被引量：4: 2013年; 目的了解星状病毒在锦州地区儿童群体中的感染情况。方法 2011年10月-2012年3月期间采集锦州市三家医院(锦州市附属一院、锦州市妇婴医院、锦州市中心医院)5岁以下住院腹泻患儿粪便样本,采用RT-PCR法检测粪便中的星状病毒,分析星状病毒在腹泻儿童中的感染率,感染型别,并进行毒株的遗传进化分析。结果 253份粪便样本中,星状病毒感染29例,感染率12.3%,序列测序及遗传进化分析表明,均为星状病毒Ⅰ型1d亚型。结论星状病毒可能是锦州地区秋冬季婴幼儿腹泻的重要致病因素之一,并以HAstV-Ⅰ型1d亚型为主要流行毒株。; 王文牛科阚丽丽张尚松杜海婷赵微; 关键词：星状病毒儿童腹泻感染率

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王文