梁娟
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：桂林医学院生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞模型的建立被引量：1
- 2017年
- 目的研制一种能够表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)模型,以应用于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)研究。方法构建PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR慢病毒载体,按最佳感染复数转染MSCs,荧光定量PCR检测hCD4和hCCR5的mRNA的表达,免疫印迹法检测MSCs中hCD4和hCCR5蛋白的表达,免疫荧光法检测hCD4和hCCR5荧光的表达;将建立的MSCs细胞进行HIV-1感染后,PCR检测HIV RNA的表达。结果 MSCs经转染慢病毒载体后,hCD4和CCR5mRNA凝胶电泳可见193bp和75bp的阳性条带,mRNA的qRT-PCR检测可见其表达升高(P<0.01);Western blot检测可见55.0×10~3(hCD4)和40.6×10~3(hCCR5)的阳性条带;免疫荧光成像可见存在CD4和CCR5的荧光表达,而空载慢病毒载体呈阴性。转染后MSCs细胞感染HIV-1后在培养细胞与上清液中HIV-1RNA均显著升高(P<0.05)。结论成功建立了高效表达hCD4/CCR5蛋白的骨髓间充质干细胞模型,具备对HIV-1易感的特性,可应用于HIV的发病机制、抗病毒、疫苗开发等研究。
- 李雅婧李雅婧诸葛福艳梁娟何金洋谭宁
- 关键词：骨髓间充质干细胞HIV-1细胞模型基因表达
- 表达hCD4和hCCR5基因的慢病毒载体的构建
- 2016年
- 目的:构建一种高效转染h CD4和h CCR5基因的慢病毒载体。方法:应用Gateway技术构建可表达h CD4和h CCR5的质粒载体PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5,并进行酶切和测序鉴定,进行慢病毒包装,用q RT-PCR方法检测293T细胞中h CD4/CCR5的m RNA表达。将本慢病毒载体转染于小鼠白血病细胞L615,应用q RT-PCR检测细胞内h CD4/CCR5 m RNA的表达及对HIV-1的易感性。结果:成功构建PLA.Ex Bi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5质粒表达载体,包装成的慢病毒载体在293T细胞中具有h CD4/CCR5 m RNA水平的高表达(P<0.05);转染于L615细胞亦表现出h CD4/CCR5 m RNA水平的高表达(P<0.05),并具备了HIV-1入胞感染的特点。结论:成功建立h CD4和h CCR5基因双启动的慢病毒载体,可使目的细胞高效表达h CD4及h CCR5分子,对HIV-1宿主细胞的制备、HIV/AIDS的发病机制和抗病毒研究具有积极的意义。
- 李雅婧诸葛福艳梁娟何金洋谭宁曾常春
- 关键词：慢病毒载体HCCR5质粒
- 巨噬细胞通过下调miR-20a诱发凋亡促进结核菌清除的机制被引量：2
- 2018年
- 目的探讨上调或下调巨噬细胞中miR-20a对结核菌诱导的细胞凋亡以及细菌清除的影响,鉴定结核免疫干扰新靶点。方法构建表达miR-20a-5p、miR-20a-5p-inh且含绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体,用无血清转染试剂稀释,在5μg/mL聚凝胺存在下以感染复数(MOI)为10转染人单核细胞株THP-1细胞3 h,72 h后通过流式细胞仪筛选出GFP+细胞,佛波脂(PMA)刺激24 h后分化为巨噬细胞;结核分枝杆菌灭活菌(H37Ra)或过氧化氢(H_2O_2)处理细胞后,进行荧光素PE标记的膜联蛋白(Annexin)V和7-氨基放线菌素D(7AAD)染色15 min,流式细胞术检测Annexin V(+)和Annexin V(+)7AAD(+)细胞早晚期凋亡情况,方差分析(ANOVA)和多重比较试验(Newman-Keuls)分析细胞间凋亡率的差异;H37Ra以MOI为10感染巨噬细胞30 min,磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次后放入CO_2培养箱,3 d后收集裂解物并接种到含10%OADC增菌液的7H11琼脂平板上,37℃培养箱培养3~4周后使用标准程序重复三次计算细菌菌落数。结果成功构建miR-20a-5p、miR-20a-5p-inh慢病毒载体以及稳定促进或抑制miR-20a表达的细胞株;流式细胞术检测显示:在未刺激情况下细胞早、晚期凋亡的差异不明显,H37Ra或H_2O_2刺激后,细胞早、晚期凋亡率发生明显变化,以晚期凋亡率显著增加为主;方差分析和多重比较试验提示:在未刺激情况下过表达或抑制miR-20a,细胞凋亡率无显著差异,H37Ra或H_2O_2刺激后在miR-20a过表达时细胞凋亡率无明显变化,抑制miR-20a的表达细胞凋亡率显著增加;H37Ra感染巨噬细胞后收集细胞裂解物并接种到平板中培养,miR-20a过表达的细胞内结核菌存活率较高,抑制miR-20a表达结核菌的存活率下降。结论结核菌感染巨噬细胞后,宿主通过下调miR-20a诱发细胞凋亡进而清除结核菌。
- 张娟娟贺星梁娟唐怡敏唐怡敏叶涛生叶涛生张国良
- 关键词：微小RNA结核分枝杆菌
- HIV-1动物模型及跨物种感染的研究进展被引量：2
- 2017年
- 人类免疫缺陷病毒(HIV)是一种感染人类免疫系统细胞、导致获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的慢病毒,其中HIV-1是导致AIDS全球流行的主要病原体。本文简要综述了HIV-1感染的黑猩猩和平顶猴、SIV与SHIV感染的猴、stHIV-1和HSIV感染的猕猴等非人灵长类动物模型,以及HIV-1感染的嵌合体鼠、HIV-1感染的兔和HIV-1感染的转基因鼠等非灵长类动物模型,并分析了各类模型的特点。对于HIV-1跨物种感染所面临的种族屏障和关键点的研究进展亦作了论述,分析了HIV-1感染的鼠类跨种族模型的进展情况,以促进HIV-1的发病机制、药物疗效和疫苗制备等研究。
- 梁娟曾常春李雅婧李雅婧
- 关键词：HIV-1动物模型SIVSHIV
