房志家
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 供职机构：长沙学院生物工程与环境科学系更多>>
- 发文基金：长沙市科技局科技项目湖南省高等学校科学研究项目湖南省大学生研究性学习与创新性实验计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 翘嘴鳜生长激素cDNA克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank上大眼鳜生长激素cDNA序列(收录号:AY155227)设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术从翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)脑垂体中克隆了生长激素基因(scGH)编码区序列并对其真核表达载体的构建进行了研究。结果显示:扩增片段全长615 bp,共编码204个氨基酸。该序列与GenBank上大眼鳜生长激素cDNA序列同源性为99.84%。将scGHcDNA序列定向插入pYES2/CT真核表达载体中,经过筛选、酶切和测序,证明重组子中确实插入了翘嘴鳜GH片段。
- 罗小华刘臻肖克宇张建社梅秋兰房志家鲁双庆
- 关键词：生长激素基因克隆
- 鳜(Siniperca chuatsi)生长激素基因克隆和原核表达被引量：7
- 2010年
- 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从鳜脑垂体总RNA中扩增生长激素(GH)成熟肽基因,将成熟生长激素的cDNA定向克隆到表达载体pET-32a(+),并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。结果表明,鳜生长激素(GH)基因含开放阅读框(ORF)615个核苷酸,编码204个氨基酸,蛋白分子量为23kDa,等电点为7.07,其中酸性氨基酸占10.78%,碱性氨基酸占12.74%,疏水氨基酸为占44.12%,极性氨基酸占32.35%。在IPTG终浓度1.0mmol/L、温度37℃和培养时间4h的最佳诱导表达条件下,鳜生长激素基因(GH)在大肠杆菌中获得高效表达,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为43kDa的鳜生长激素与硫氧还蛋白(Thioredoxni,Trx)融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白58%。Western印迹分析也证实含6×His标签的重组融合蛋白能够很好地与抗6×His单抗发生反应。本研究为下一步鳜生长激素基因(GH)的生物学功能及应用奠定了基础。
- 刘臻罗小华鲁双庆谢帝芝房志家肖克宇
- 关键词：生长激素基因克隆原核表达
