唐娟
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Prohibitin蛋白与卵巢癌紫杉醇耐药相关性的初步研究被引量：4
- 2012年
- 目的:研究转染pshRNA/prohibitin(PHB)的RNA干扰对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的生物学特性的影响。方法:采用Western印迹及实时PCR方法验证卵巢癌紫杉醇耐药细胞株(SKOV3/Taxol-25)和敏感细胞株(SKOV3)中PHB蛋白与mRNA的表达差异。以脂质体Lipofectamine2000为载体,将针对PHB基因设计的带有荧光蛋白的三靶特异性小发夹RNA干扰片段,即pshRNA/PHB427(PHB1实验组)、pshRNA/PHB248(PHB2实验组)、pshRNA/PHB136(PHB3实验组)瞬时转染耐药细胞株,另设阴性对照组。转染48 h后,用Western印迹及实时PCR方法检测PHB蛋白与mRNA的表达情况,筛选出沉默效果明显的两个片段(PHB1及PHB3)为实验组,与阴性对照组进行后续实验。用MTT及流式细胞术检测实验组及对照组的细胞增殖、紫杉醇IC50及凋亡情况。结果:耐药细胞株中PHB蛋白相对表达量及mRNA相对表达量(2–ΔΔCt)明显高于敏感细胞株(P<0.05)。PHB1和PHB3实验组的蛋白相对表达量及mRNA相对表达量(2–ΔΔCt)较阴性对照组明显降低(P<0.05)。转染48 h及72 h后PHB1及PHB3实验组细胞的增殖较阴性对照组明显减慢(P<0.05);干扰后72 h各实验组紫杉醇IC50较干扰前明显下降(P<0.05);转染48 h后PHB1及PHB3实验组细胞凋亡率较阴性对照组明显增加(P<0.05)。结论:针对PHB合成的shRNA能有效抑制耐药细胞株中PHB基因表达,沉默PHB基因后耐药细胞株的细胞增殖能力下降,凋亡率增加,对紫杉醇敏感性增加,提示PHB与卵巢癌紫杉醇耐药相关,干扰PHB基因的表达可能降低卵巢癌紫杉醇耐药性。
- 唐娟曹兰琴易红汤参娥
- 关键词：RNA干扰卵巢癌PROHIBITIN紫杉醇耐药
