刘桂平
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：广东医学院衰老研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金东莞市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Mmu-miR-107与Cacna2d1基因3'UTR结合位点的预测及验证被引量：1
- 2015年
- [目的]预测并验证mmu-miR-107与Cacna2d1基因3'UTR的结合位点。[方法]生物信息学预测miR-107与小鼠Cacna2d1基因3'UTR的结合位点,将包含3个靶位点的3'UTR片段克隆至荧光素酶载体p GL3中,构建野生型p GL3-Cacna2d1-WT3'UTR载体;并用重叠延伸PCR技术构建分别含有单个突变位点的载体Mut1200-207、Mut2361-367、Mut3902-908和同时含有3个突变结合位点的载体Mut4plus。将各重组质粒与miRNA mimics共转染C2C12细胞,检测荧光素酶活性。[结果]与共转染p GL3-Cacna2d1-WT 3'UTR和miR-NC组相比,共转染p GL3-Cacna2d1-WT 3'UTR和mimics-miR-107组荧光素酶活性显著下降(P<0.01);与共转染对应的突变体和miR-NC组相比,转染突变体Mut2361-367/Mut3902-908和mimics-miR-107组的荧光素酶活性均下降(P<0.05);转染突变体Mut1200-2077/Mut4plus和mimics-miR-107组的荧光素酶活性下降不明显(P>0.05)。[结论]Cacna2d1基因3'UTR段双荧光素酶基因报告载体及突变体构建成功,初步证实miR-107与Cacna2d1 3'UTR的200-207位点结合。
- 阮杰翁亚光赵炜熊兴东张春龙李江滨刘桂平黄池荣付思莹刘新光
- 关键词：结合位点
- 荧光报告系统验证miR-142-5p的靶基因Becn1
- 2016年
- 目的验证miR-142-5p的靶基因——自噬相关基因Becn1。方法生物信息学预测miR-142-5p与Becn1的结合位点,构建含有结合位点的Becn1基因3＇UTR野生型和突变型质粒,将重组质粒与miR-142-5p-mimics或miR-NC共转染C2C12细胞,检测荧光素酶活性。结果 miR-142-5p与Becn1的3＇UTR存在一个结合位点（123~129）;成功构建野生型重组质粒p GL3-Becn1-3＇UTR和靶位点含3个碱基突变的重组质粒Mut-3＇UTR;与共转染p GL3-Becn1-3＇UTR和miR-NC组相比,共转染p GL3-Becn1-3＇UTR和miR-142-5p-mimics组荧光素酶活性显著下降,约为41.2%（P〈0.01）;而与对照组相比,共转染Mut-3＇UTR和miR-142-5p-mimics组的荧光素酶活性下降不明显（P〉0.05）。结论初步验证自噬相关基因Becn1是miR-142-5p的靶基因。
- 阮杰黄池荣刘桂平梁国辉张健刘新光
- 关键词：MICRORNA
- mmu-miR-107调控Cacna2d1基因的mRNA水平被引量：1
- 2015年
- 目的生物信息学预测并实验验证mmu-miR-107的靶基因。方法利用Target Scan、miRanda、Clip-seq及miRDB预测mmu-miR-107靶基因,分别构建含有候选靶基因(Cacna2d1、Capza2、Celsr2、Csnk1g2和Tmem47)3'UTR的荧光素酶报告载体p GL3,通过双荧光素酶检测系统、时实定量PCR进一步验证预测的靶基因。结果成功构建分别含有5个候选靶基因3'UTR的荧光素酶报告载体;与mi R-NC组相比,mi R-107组共转染p GL3-Cacna2d1 3'UTR、p GL3-Cav13'UTR的荧光素酶活性均显著下降(P<0.01或0.05);其余候选靶基因Capza2、Celsr2、Csnk1g2和Tmem47的共转染组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05);过表达或下调C2C12细胞的miR-107,可有效降低或提高Cacna2d1的mRNA水平表达(P<0.05)。结论初步验证Cacna2d1是mmu-miR-107的靶基因。
- 阮杰翁亚光赵炜李江滨黄华明黄池荣刘桂平刘新光
- 关键词：生物信息学靶基因
