王小利
- 作品数：64 被引量：181H指数：8
- 供职机构：贵州省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技计划项目贵州省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 高羊茅逆境胁迫蛋白基因FaUSP的克隆、表达及生物学功能分析被引量：2
- 2021年
- 逆境胁迫蛋白(Universal stress protein,USP)参与干旱、高温、氮胁迫和高盐等多种逆境胁迫反应。为研究逆境胁迫蛋白USP在高羊茅中的表达模式,采用cDNA末端快速扩增技术从高羊茅叶片中克隆USP基因,命名为FaUSP。结果表明,FaUSP全长为844 bp,含501 bp的开放阅读框,共编码166个氨基酸,具有USP家族典型的USPA结构域。经系统进化树分析,高羊茅FaUSP蛋白与禾本科植物小麦、大麦、山羊草的USP蛋白亲缘关系较近。荧光定量PCR表明,高羊茅FaUSP受干旱、高温、氮胁迫及高盐胁迫的诱导表达上调,构建FaUSP超量表达载体,利用农杆菌侵染法转化菊苣,干旱胁迫下过量表达FaUSP菊苣可溶性蛋白、GR、SOD、POD、CAT的合成显著高于野生型,表明FaUSP的超量表达可以增强菊苣的抗旱能力,推测该基因与抗旱性相关。
- 陈莹陈锡王茜王小利
- 关键词：高羊茅克隆
- 不同促生菌培养发酵分泌的激素和有机酸含量被引量：3
- 2020年
- 为复合促生菌肥研制提供参考,以前期筛选试验较优的2株溶磷菌(P1和P2)和2株固氮菌(C1和C2)为试材,对溶磷菌剂、固氮菌剂和溶磷菌+固氮菌组合的菌剂进行培养,采用高效液相色谱法测定发酵液分泌的激素和有机酸含量。结果表明:不同菌剂均未分泌脱落酸(ABA),均分泌生长素(IAA)和赤霉素(GA3),P2+C1组合菌剂分泌的IAA和GA3极显著高于P2,分别较P2增加51329.51%和100.42%;P1+C2组合菌剂分泌的IAA和GA3较P1低24.81%和51.45%,且GA3含量差异显著;激素组合分泌的总量以P2+C1最多,为155.781μg/m L,P1+C2最少,为3.967μg/m L。所有组合的菌剂都分泌草酸、乳酸、苹果酸和柠檬酸,P2+C1组合菌剂分泌的甲酸、苹果酸、柠檬酸和丁酸含量都极显著高于P2,较P2分别增加40.93%、1051.89%、357747.29%和749.48%;P1+C2分泌的草酸、甲酸、苹果酸和柠檬酸均显著高于P1,较P1分别增加627.66%、89.30%、252.89%和37971.47%;总有机酸含量都大于单一菌剂的分泌量,且差异显著。P2+C1发酵液分泌的激素和有机酸最多,分别为155.781μg/mL和18318.38μg/mL,是最佳组合菌剂。
- 舒健虹王子苑刘晓霞李亚娇王小利
- 关键词：促生菌激素有机酸
- 高羊茅FaGST1基因克隆、亚细胞定位及表达分析被引量：3
- 2020年
- 【目的】克隆高羊茅谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因FaGST1,并进行亚细胞定位及表达分析,为深入研究该基因的抗逆分子调控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR和RACE从高羊茅黔草1号中克隆FaGST1基因,对其进行生物信息学分析,构建植物融合表达载体pCAMBIA1300-FaGST1-GFP,通过农杆菌介导转入烟草叶片表皮细胞,观察FaGST1基因亚细胞定位情况,并利用实时荧光定量PCR检测高盐、高温、干旱及低氮胁迫处理下高羊茅叶片中该基因的表达情况。【结果】克隆获得FaGST1基因cDNA全长序列为1003 bp,开放阅读框(ORF)为681 bp,编码227个氨基酸残基,其编码蛋白的分子量约25.60 kD,理论等电点(pI)为5.58,亲水指数平均值-0.342,不稳定系数32.96,为稳定的亲水蛋白,定位于细胞核。FaGST1蛋白二级结构中,α-螺旋占50.44%,β-转角占5.75%,无规则卷曲占30.54%,延伸链占13.27%。FaGST1蛋白的保守结构区域为含有G位点的N末端结构域和含有H位点的C末端结构域。FaGST1蛋白与黑麦草GST蛋白(AMY26594.1)的氨基酸序列相似性最高,为93%,其次是海滨雀稗GST蛋白(AMN87043.1),为91%,与玉米(ACG39365.1)和小米(KQK86785.1)GST蛋白氨基酸序列相似性均在80%以上,与系统发育进化树分析结果基本相符,即FaGST1蛋白与黑麦草、海滨雀稗、玉米和小米等禾本科植物GST蛋白亲缘关系较近。高羊茅FaGST1基因在干旱、高温、高盐胁迫和低氮胁迫处理下均出现抑制表达。【结论】FaGST1基因负向调控高羊茅逆境胁迫响应。
- 陈锡陈锡陈莹赵德刚袁暘暘吴佳海
- 关键词：高羊茅基因克隆亚细胞定位非生物胁迫
- 低磷与干旱胁迫下百脉根代谢组学分析被引量：5
- 2022年
- 为了探究百脉根(Lotus corniculatus)在低磷和干旱胁迫下代谢物质的变化,本实验选择对照(CK)、低磷(LP)和干旱胁迫(PEG)三种处理下的百脉根作为实验材料,利用代谢组学对低磷和干旱胁迫下的百脉根进行代谢物的分析。结果表明,干旱胁迫样本共测到390种差异代谢产物,其中314种下调表达,76种上调表达,注释到70条代谢通路。低磷胁迫样本共检测到332种代谢产物发生变化,其中209种下调表达,123种上调表达,注释到58条代谢通路。干旱胁迫样本主要聚类为脂肪酰基、羧酸及其衍生物、有机氧化合物、类黄酮,富集程度最显著的途径为类固醇生物合成。低磷胁迫样本主要聚类为脂肪酰基、羧酸及其衍生物、有氧化合物、类黄酮,富集程度最显著的途径为苯乙烯、二芳庚烷和姜酚的生物合成。研究利用代谢组学方法对百脉根组织部位中的代谢物进行分析鉴定,探究在低磷和干旱胁迫条件下百脉根组织部位中的代谢物以及差异代谢物种类和含量,为以后百脉根非生物胁迫的研究提供数据基础。
- 李亚娇马培杰龙忠富舒健虹陈莹王小利
- 关键词：百脉根低磷干旱胁迫代谢组学
- 低氮胁迫对高羊茅苗期生理特性的影响被引量：6
- 2022年
- 以‘黔草1号’高羊茅(Festuca arundinacea)为材料,通过低氮条件下高羊茅的生物学特性、抗氧化酶活性、内源激素和氨基酸含量等指标探究低氮条件对高羊茅生理特性的影响。结果表明:低氮胁迫下高羊茅的株高、生物量与蛋白质含量显著降低,而高羊茅叶片中的超氧化物歧化酶、过氧化物酶与谷氨酰胺合成酶活性受低氮胁迫诱导显著升高。液相质谱分析高羊茅叶片中的游离氨基酸成分表明,在低氮胁迫下大部分的游离氨基酸含量与正常处理组相比显著下降。随着胁迫时间的延长,油菜素内酯、细胞分裂素、生长素的含量呈现先升后降的趋势,赤霉素与脱落酸的含量呈现逐渐升高的趋势。表明低氮严重影响了高羊茅的正常生长,而高羊茅通过调节自身抗氧化酶活性、内源激素与氨基酸含量的变化来适应低氮胁迫。
- 陈莹王茜陈锡王小利
- 关键词：低氮胁迫高羊茅内源激素氨基酸
- 高产铁载体菌对重金属胁迫下牧草种子萌发的影响
- 2023年
- 为研究贵州野生白三叶(Trifolium repens L.)根际高产铁载体菌TSTJ-5在重金属胁迫下对牧草种子萌发的影响,本试验对菌株进行鉴定,检测其促生特性,分别利用菌株发酵上清液、菌体和菌液,研究菌株在不同浓度的Cu^(2+)、Zn^(2+)和Pb^(2+)胁迫下对多花黑麦草和白三叶种子萌发的影响。结果表明,高产铁载体菌TSTJ-5鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.),具有溶解无机磷、分泌IAA和固氮能力,多花黑麦草和白三叶种子对Zn^(2+)和Pb^(2+)均具有较强的耐性,TSTJ-5菌株在高浓度Cu^(2+)、Zn^(2+)和Pb^(2+)胁迫下能缓解重金属对供试牧草种子的毒害作用,提高种子抗逆性,促进种子发芽。研究结果可为铁载体在植物-微生物联合修复土壤重金属污染应用中提供有效的试验依据和可靠的候选菌种资源。
- 韦鑫韦兴迪丁磊磊李亚娇王小利张礼维
- 关键词：重金属胁迫种子萌发
- 过表达FaSAMDC基因提高黑麦草属植物的抗旱性和耐热性被引量：4
- 2017年
- 主要探讨了在黑麦草属植物中导入高羊茅S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(FaSAMDC)对转基因植株抗旱耐热性的提高效果,为培育黑麦草抗旱耐热新品种提供种质新材料。选择黑麦草成熟种子为外植体,采用贵州省草业研究所分子生物学实验室构建的过表达载体以及黑麦草胚性愈伤组织高频植株再生和农杆菌介导的遗传转化体系,将克隆自高羊茅的FaSAMDC基因转入贵州地区主栽品种多花黑麦草特高和多年生黑麦草四季的基因组内,经抗性筛选、PCR检测和Southern杂交分析验证,获得45株特高与44株四季的转基因植株,转化频率分别为2.93%和2.28%。抗旱耐热试验表明,在30℃高温和中度干旱胁迫条件下,特高转基因株系的根冠比比对照组培苗高出7.08%,叶片相对含水量(RWC)比对照高出13.12%,RWC降低幅度比对照少5.49个百分点;四季转基因株系的根冠比比对照组培苗高出6.54%,RWC比对照高出12.54%,RWC降低幅度比对照少6.50个百分点,差异均达到显著水平(P<0.05),证明转入FaSAMDC基因的黑麦草阳性株系的抗旱耐热能力得到了明显提高。形态与生长特征观测结果显示,与非转基因组培苗相比,转基因株系的叶长、株高、主茎节数减小,叶宽、单株分蘖数增加,叶色变深,植株形状趋向于叶片丛生的紧凑型,推测导入的FaSAMDC基因参与了基因表达、细胞分裂等生理功能的调节。
- 曾庆飞韦鑫蔡一鸣舒健虹吴佳海王小利
- 关键词：黑麦草根癌农杆菌
- 高羊茅FaCONSTANS基因的表达及功能分析被引量：2
- 2021年
- 植物由营养生长向生殖生长转变过程中光周期调控起着重要的作用。CONSTANS (CO)是光周期途径中的特有基因,为探讨高羊茅FaCONSTANS (FaCO)基因响应日照长短从而启动植物开花的机理,利用实时荧光定量qRT-PCR技术分析在长日照、短日照、持续光照、持续黑暗条件下FaCO基因的表达水平。构建过表达载体p1300-FaCO,利用农杆菌介导法遗传转化拟南芥,构建沉默载体p1300-FaCO-RNAi遗传转化高羊茅。结果表明,FaCO基因的表达受光周期调控,与生物钟控制的昼夜节律相关。在长日照条件下FaCO基因促进拟南芥开花,且恢复拟南芥突变体开花表型。RNAi沉默FaCO基因的高羊茅转基因植株晚花或者一直处于营养生长阶段。本研究初步探究高羊茅FaCO基因对开花过程的调控,这将有助于更进一步了解该基因的生物学功能。
- 陈锡陈锡刘晓霞舒健虹王小利舒健虹
- 关键词：高羊茅
- 胍基乙酸对肉牛生长性能、血浆抗氧化和糖代谢指标及血液相关基因表达的影响被引量：13
- 2021年
- 本试验旨在研究胍基乙酸对肉牛生长性能、血浆抗氧化和糖代谢指标及血液相关基因表达的影响。选取平均体重为(473.58±64.40) kg的健康西门塔尔牛24头,随机分为3组,每组8个重复,每个重复1头牛。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加400(G1组)和800 mg/kg(G2组)的胍基乙酸。预试期7 d,正试期49 d。结果表明:1)与对照组相比,G2组的平均日增重显著升高(P<0.05),料重比显著下降(P<0.05)。各组间的末重和平均日采食量无显著差异(P>0.05)。2)与对照组相比,G1组和G2组的血浆总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),血浆过氧化氢酶(CAT)活性极显著升高(P<0.01),血浆丙二醛(MDA)含量极显著降低(P<0.01)。各组间血浆超氧化物歧化酶(SOD)活性无显著差异(P>0.05)。3)与对照组相比,G1组和G2组的血浆葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)活性极显著降低(P<0.01),血浆丙酮酸激酶(PK)活性显著降低(P<0.05);G2组的血浆磷酸果糖激酶(PFK)活性显著降低(P<0.05);G1组和G2组的血浆肌酸激酶(CK)活性显著升高(P<0.05)。各组间血浆肌酐(CRE)含量无显著差异(P>0.05)。4)与对照组相比,G1组和G2组血液中肌酸转运蛋白(CrT)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和γ-氨基丁酸转运蛋白2(GAT2)mRNA相对表达量均极显著降低(P<0.01)。由此可见,饲粮中添加胍基乙酸能下调血液中CrT、AMPK、GAT2的mRNA相对表达量,降低糖类分解代谢,提升机体抗氧化能力,从而提高肉牛生长性能。
- 王子苑陈光吉舒健虹张蓉马广智何廷章王小利
- 关键词：肉牛抗氧化能力糖代谢基因表达
- 高羊茅生物钟基因FeZTL的克隆、亚细胞定位及表达分析被引量：4
- 2020年
- ZTL基因是控制植物生理节律和开花的关键因子,其表达受光周期和生物钟的调控。为揭示高羊茅ZTL(命名为FeZTL)的生物学功能,采用RACE技术克隆得到FeZTL基因的全长cDNA序列并进行表达分析和亚细胞定位。结果显示,FeZTL基因cDNA全长1785 bp,有一个长度为1344 bp的开放阅读框,编码447个氨基酸;FeZTL与禾本科植物的同源蛋白亲缘关系较近。其中,与二穗短柄草、节节麦、短药野生稻ZTL氨基酸序列相似性分别为89.69%、89.29%、83.61%。将构建的目的蛋白与GFP融合表达载体经共聚焦显微镜观察,发现FeZTL蛋白主要定位在细胞核。实时荧光定量分析叶片中的表达量,发现FeZTL基因在不同光照处理下的表达都呈现出昼夜振荡节律。由此得出,FeZTL基因的表达受生物钟和光周期的调控。
- 罗维舒健虹陈莹刘晓霞吴佳海吴佳海
- 关键词：高羊茅亚细胞定位
