王会敏
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 人乳铁蛋白的沙漠小球藻表达系统的构建与鉴定被引量：1
- 2017年
- 为获得人乳铁蛋白的沙漠小球藻(Chlorella sp.GTD8A1)的表达系统和稳定的小球藻GTD8A1-h LF工程藻种,将人乳铁蛋白基因导入小球藻细胞中进行表达鉴定。以人血c DNA为模板,RT-PCR扩增得到人乳铁蛋白基因(Gen Bank登录号NM-002343.4),经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后,连接到植物表达载体p CAMBIA2300-35S-OCS中,获得重组质粒载体p CAMBIA2300-35S-h LF-OCS,将重组质粒电击转入GTD8A1中,通过菌落PCR鉴定后扩大培养,在DNA和RNA水平分析人乳铁蛋白基因的整合和转录,SDS-PAGE和Western Blot分析获得70 ku的目的蛋白;将转基因藻种(GTD8A1-h LF)在BBM培养基中进行培养周期优化。结果表明,重组人乳铁蛋白在沙漠小球藻细胞中表达成功;通过Elisa测其人乳铁蛋白表达量在20 d时达到最大,浓度为13.28 mg/L。
- 牟云汪文伦许万云胡梦薇王丹严国王会敏高剑峰
- 关键词：小球藻人乳铁蛋白SDS-PAGEWESTERNBLOT
- 中国美利奴羊TLR4基因多态性的PCR-SSCP鉴定被引量：1
- 2017年
- 为了研究中国美利奴羊TOLL样受体(TLR4)基因第3外显子上的单核苷酸多态性(SNPS)和单氨基酸多态性(SAPS)。利用生物信息学方法对NCBI上公布的有关绵羊的TLR4序列进行下载并用Seq Man对下载的绵羊TLR4基因外显子进行多态性比对分析,然后采用PCR-SSCP并结合测序的方法对119只中国美利奴羊TLR4基因的外显子3的扩增片段进行分析。通过分析发现,在中国美利奴羊第3外显子1 180 bp处有1个突变位点,由G突变成T,氨基酸由天冬氨酸(D)变成酪氨酸(Y),即该位点为有义突变。在1 537 bp处也有1个突变位点,即由G突变成了A,氨基酸由丙氨酸(A)变成苏氨酸(T),在TLR4第3外显子的其他位点并没有SNPS位点,说明中国美利奴羊TLR4基因上的第3外显子区域有2个多态位点。
- 王会敏罗成齐江姣王元元李村院高剑峰
- 关键词：中国美利奴羊多态性生物信息学方法PCR-SSCP外显子突变位点
- 绵羊DRA基因外显子2酵母表面展示库的构建及鉴定被引量：3
- 2016年
- 根据绵羊DRA基因序列和酿酒酵母表面展示载体pYD1上的多克隆位点设计特异性引物,从绵羊组织中提取总RNA并逆转录,利用PCR技术扩增得到DRA基因,克隆获得762bp目的片段,并提交GenBank,登录号:KR422362。将该基因通过双酶切连接到表面展示载体pYD1上,成功构建了酿酒酵母表面展示重组质粒pYD1-DRA。将DRA基因外显子2两端进行基因点突变,形成新的酶切位点,继而对外显子2设计特异性引物,对绵羊大样本进行DNA池化,并将外显子2扩增产物测序,分析其多态性获得多态位点。重组质粒双酶切得到246bp具有多态性的外显子2,将其连接到经同样酶双酶切的表面展示重组突变载体pYD1-DRA-TB上,成功构建了酿酒酵母表面展示库。将其转化用于表面展示的酿酒酵母EBY100感受态细胞中,得到酵母转化子,挑取酵母菌的单克隆通过PCR扩增及序列测定证实了DRA基因库已成功整合到酿酒酵母基因组中。经半乳糖诱导后,通过免疫荧光法在荧光显微镜下检测得到DRA基因库已成功展示在酵母细胞表面。
- 许万云王会敏汪文伦胡梦薇严国李建华高剑峰
- 关键词：绵羊DRA外显子2点突变免疫荧光法
- 沙漠小球藻的蛋白双向电泳分析被引量：1
- 2016年
- 为建立适用于小球藻（Chlorellasp.TLD6B）蛋白质组分析的双向电泳体系,该研究比较了TCA/丙酮沉淀法和Trisol提取法对小球藻蛋白的提取效果,不同pH梯度IPG胶条（pH3~10和pH4~7）、不同蛋白质上样量、不同聚焦程序对小球藻蛋白的分离效果。结果表明：（1）采用Trisol提取法可获得较高纯度蛋白,当选择24cm pH 3~10的线性IPG胶条时,上样量为500μg,聚焦80 000Vh效果最佳,可分辨蛋白点达726个;当选择24cm pH 4~7的线性IPG胶条时,上样量为1 000μg,聚焦80 000Vh效果最佳,可分辨蛋白点达1 230个。（2）该实验随机挑选了10个胶内蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS鉴定分析表明,其中8个蛋白点鉴定成功,进一步说明Trisol提取法可适用于小球藻双向电泳分析。
- 牟云汪文伦严国王会敏高剑峰
- 关键词：小球藻双向电泳
- 中国美利奴羊TLR2基因多态性及其与布鲁氏菌病的相关性分析
- 2018年
- 试验旨在研究Toll样受体2(Toll-like receptor,TLR2)基因的多态性及其与中国美利奴羊布鲁氏菌病易感性的相关性。利用生物信息学方法对NCBI上公布的绵羊TLR2基因序列进行比对,选出多态位点丰富的片段进行扩增,运用PCR-SSCP的方法对206个中国美利奴布鲁氏菌病阴性样本和80个中国美利奴羊布鲁氏菌病阳性样本进行TLR2基因的多态性检测,然后对不同等位基因的PCR产物进行测序,确定该基因的多态性位点,经卡方检验分析每个SNP位点的等位基因频率、基因型频率及其多态性与布鲁氏菌病易感性的相关性,利用生物信息学软件分析RNA二级结构及蛋白质的二级结构。结果表明,在279bp的序列中共检测到3个SNPs,分别为:C1731T、G1737C和G1749T,均未引起对应氨基酸的改变,属于无义突变。这些位点在病例组和对照组之间的等位基因频率及基因型频率均不存在显著差异(P>0.05)。各突变位点均能引起RNA二级结构和最小自由能的改变,而蛋白质的二级结构均未改变。由此得出,中国美利奴羊TLR2基因的3个SNPs位点(C1731T、G1737C和G1749T)与中国美利奴羊布鲁氏菌病易感性无相关性。
- 罗成王元元王会敏谭君周光普高剑峰
- 关键词：中国美利奴羊PCR-SSCP多态性布鲁氏菌病
- 沙漠小球藻转人乳铁蛋白的电转优化被引量：2
- 2018年
- 对沙漠小球藻建立高效的遗传转化方法,对电击转化的条件和相关参数进行优化。作者以人乳铁蛋白基因作为电转条件优化的参考基因,采用单因素实验确定转染效率的电转化条件,然后进行电转化正交实验,得到最优的电转化组合。结果表明:最优的电转化组合是电压1 400 V、培养周期8 d、渗透剂浓度0.2 mol/L、渗透时间为0 h、质粒质量浓度为6 ug/mL、电击缓冲液浓度为0.4 mol/L,其细胞致死率为51.30%、荧光百分率为52.54%、PCR阳性平均百分率为42.30%。
- 汪文伦牟云胡梦薇许万云严国王会敏高剑峰
- 关键词：电转化小球藻人乳铁蛋白
- PEG6000对沙漠小球藻生长及油脂积累的影响被引量：1
- 2016年
- 采用一次性培养的方式研究不同添加量PEG6000对小球藻(Chlorella sp.TLD6B)吸光度(OD680)、生物量、生长速率、可溶性蛋白含量、脂肪酶活性和总脂含量的影响。结果表明:不同添加量PEG6000对小球藻吸光度(OD680)、生物量、生长速率和可溶性蛋白含量的影响总体表现为抑制;随着培养时间的延长,同一PEG6000添加量下脂肪酶活性大体呈上升、下降再上升趋势,而对照组则呈先下降后上升趋势;对照组及5%、10%、20%、30%添加量的PEG6000胁迫下最终小球藻脂肪酶活性分别为300.87、320.67、342.43、360.21、287.76 U/g,总脂含量分别为29.64%、31.28%、33.45%、35.11%、25.26%。结果显示,不同添加量的PEG6000均抑制了小球藻的生长和可溶性蛋白合成;但适宜添加量的PEG6000提高了小球藻的脂肪酶活性及总脂含量。
- 牟云汪文伦李红严国王会敏高剑峰
- 关键词：PEG6000小球藻总脂含量
- 中国美利奴羊eNOS基因exon8多态性及其与布鲁氏菌病易感性相关性分析
- 2015年
- 本试验旨在研究内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因exon8多态性与中国美利奴羊布鲁氏菌病易感性的相关性。利用生物信息学方法对人和中国美利奴羊eNOS基因exon8序列进行比对,并对NCBI SNP数据库上人eNOS基因exon8多态性进行了统计分析。通过PCR-SSCP对101只中国美利奴羊阴性样本和61只中国美利奴羊阳性样本eNOS基因exon8的多态性进行检测,然后对不同等位基因进行PCR产物测序,旨在确定该基因exon8多态性位点,并对SNP位点的等位基因频率、基因型频率进行统计分析。在eNOS基因exon8序列142bp处检测到一个新的SNP位点(ss974768653:A142G),该位点在病例组和对照组之间的等位基因频率及各基因型间不存在显著差异性(P>0.05)。eNOS基因exon8A142G多态性位点与中国美利奴羊布鲁氏菌病易感性可能无相关性。
- 许万云王会敏李建华汪文伦胡梦薇高剑峰
- 关键词：ENOSPCR-SSCP多态性外显子
