殷玉梅 作品数:5 被引量:8 H指数:2 供职机构: 内蒙古农业大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 内蒙古自治区自然科学基金 国家自然科学基金 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
沙冬青C2H2型锌指蛋白基因AmZFP1的克隆与表达分析 被引量:5 2017年 为了研究强抗逆植物沙冬青寒旱诱导表达基因AmZFP1(Zinc finger protein 1)的生理功能,通过转录谱分析,从中鉴定出一个受寒旱诱导的ZFP全长cDNA序列并命名为AmZFP1。利用半定量RT-PCR方法对AmZFP1进行了表达分析,结果表明,在室内正常培养的沙冬青幼苗中该基因有较高表达量,在低温或干燥处理2~48 h其表达量明显上调,尤其以干燥处理上调速度更快且上调幅度略高;在野外自然生长植株的嫩叶、花蕾和幼嫩果荚中AmZFP1均有较明显的表达,而在嫩枝和根中检测不到其转录本;在野外植株的嫩叶中,AmZFP1在严冬季节高表达,而在春、夏、秋温热季节表达水平低或很微弱。利用RT-PCR方法克隆到AmZFP1编码区cDNA(816 bp),推测其编码蛋白含有2个典型C2H2型锌指结构域及一个核定位信号。此外成功将该cDNA片段构建到植物表达载体p3300-353T上,为下一步深入开展该基因功能研究奠定了基础。 任美艳 王志林 郭慧琴 薛敏 殷玉梅 王茅雁关键词:沙冬青 锌指蛋白 基因克隆 沙冬青RING型锌指蛋白基因AmRFP1的克隆与功能初步分析 被引量:2 2017年 利用RT-PCR方法,从强抗逆植物蒙古沙冬青克隆到1个受寒旱诱导的锌指蛋白基因AmRFP1。预测其编码蛋白由366个氨基酸残基组成,其中含有1个C3H2C3型锌指结构域,故属于RING-H2(C3H2C3)型锌指蛋白。该蛋白还含有2个跨膜区,很可能定位于细胞质膜。半定量RT-PCR分析表明,在不同季节野外生长沙冬青植株嫩叶中,AmRFP1在夏季只有低水平表达,进入秋季后表达量明显增加,尤其在秋末冬初其表达量迅速增加并达到全年最高峰,但在进入最寒冷的隆冬后又回落至秋季水平并维持到翌年春季基本未变。将该基因在拟南芥中超表达,则明显降低了转基因拟南芥的抗冻性。 任美艳 杨晓茹 殷玉梅 郭慧琴 张艳霞 薛敏 王茅雁关键词:沙冬青 基因克隆 功能分析 沙冬青AmFAD7和AmFAD8基因的克隆与转化及其功能初步分析 被引量:1 2018年 对强抗逆植物蒙古沙冬青2个脂肪酸去饱和酶基因AmFAD7和AmFAD8的功能进行了初步研究。结果表明:(1)AmFAD7和AmFAD8的编码蛋白分别含455和457个氨基酸残基。(2)半定量RT-PCR分析显示,在野外生长植株的嫩叶中,AmFAD7表达量在夏季很低、冬季较高,春秋两季略低于冬季,而AmFAD8在春秋两季和初冬时表达量高于其他月份;在低温(4℃^-6℃梯度降温)处理2~48h的幼苗中,AmFAD7的表达呈先降低后升高的变化趋势,而AmFAD8的表达比处理前略有上调;在高温(42℃)处理2~48h的幼苗中,2个基因的表达均被抑制,尤其对AmFAD7的抑制较为迅速而且明显;在干燥处理2~48h的幼苗中,AmFAD7的表达量有较明显的升高,而AmFAD8则略有降低。(3)成功构建了2个基因的植物表达载体(p3300-35S-AmFAD7和p3300-35S-AmFAD8)并转化拟南芥,分别获得18和16个转基因株系。RT-PCR检测表明,其中F7-1和F7-2以及F8-1~F8-4转基因株系中目的基因的表达量均较高。(4)相对电导率分析显示,在正常温度下,AmFAD7转基因株系(F7-1和F7-2)的相对电导率与野生型无显著差异;在低温(-1℃)胁迫24h后,F7-1和F7-2的相对电导率(分别为32.8%和36.1%)显著低于野生型(48.5%),而在高温(37℃)胁迫24h后,F7-1和F7-2的相对电导率(分别为44.7%和41.9%)显著高于野生型(33.2%)。研究表明,AmFAD7在转录水平受低温和干燥胁迫的诱导,但被高温胁迫抑制,而AmFAD8的转录受低温诱导但被干燥和高温胁迫抑制;在拟南芥中组成型表达AmFAD7增强了转基因植株在低温胁迫下细胞膜的稳定性及其耐冻性,但却增加了其在高温胁迫下的细胞膜损伤程度和热敏感性。 薛敏 郭婷 任美艳 殷玉梅 王茅雁关键词:沙冬青 脂肪酸去饱和酶 基因克隆 耐冻性 异源表达蒙古沙冬青AmDREB1F基因提高转基因拟南芥的耐逆性 2021年 脱水应答元件结合蛋白(Dehydration-responsive element binding proteins,DREBs)是一类重要的植物耐逆相关转录因子。蒙古沙冬青Ammopiptanthus mongolicus是中国西北荒漠区特有的强耐逆常绿阔叶灌木。为探明其AmDREB1F基因在耐受非生物逆境中的功能和作用机理,文中对该基因编码蛋白的亚细胞定位、表达模式和转基因拟南芥的耐逆性进行了分析。结果表明:AmDREB1F编码的蛋白质定位于细胞核内;在室内培养幼苗中,该基因在正常条件下不表达,在低温和干旱胁迫下有较明显表达,在高盐和高温胁迫下仅有微弱表达,而在脱落酸(Abscisicacid,ABA)处理下不表达;在野外生长植株的叶片中,其表达量在秋末、冬季和早春远高于其他季节,而不同器官相比,其在根和未成熟果荚中的表达量远高于其他器官;将AmDREB1F在拟南芥中组成型表达可提高多个受DREBs调控的胁迫响应基因的转录水平,增强转基因株系对干旱、高盐和低温以及氧化胁迫的耐性,同时导致其生长发育延滞,外施赤霉素3可消除生长延滞现象;将该基因进行胁迫诱导表达也可提高转基因拟南芥对上述非生物胁迫的耐受性,而不影响其生长发育。这些结果说明AmDREB1F可能通过ABA非依赖的信号途径在响应和耐受逆境胁迫中起正调节作用。 唐宽刚 董博 温小俊 殷玉梅 薛敏 苏子先 王茅雁关键词:沙冬青 转基因 耐逆性 蒙古沙冬青J蛋白基因AmJ20的克隆与表达分析 2017年 DNA J蛋白是植物中广泛存在的一类分子伴侣,对于维持正常和逆境条件下蛋白质的稳态具有重要作用。我们在前期通过对强抗逆植物蒙古沙冬青进行转录组分析,发现一个寒旱诱导表达的J蛋白即Am J20编码序列,但其3'端编码区不完整。本研究通过3'RACE获得其c DNA全长序列(800 bp),推测其编码蛋白由179个氨基酸残基组成,含一个典型的J结构域,属于Ⅲ型J蛋白,此外还具有叶绿体和细胞核双定位信号;利用半定量RT-PCR方法检测该基因在野外生长植株中的时空表达模式,发现其在春、夏、秋季只有微量表达,甚至检测不到转录本,而在严冬时节高表达,此外在叶片中的表达量明显高于根、嫩枝、花蕾和幼嫩果荚;利用RT-PCR方法克隆到该基因编码区c DNA并将其插入到植物超表达载体上,为通过转基因植物分析该基因的功能提供了理论依据。 殷玉梅 郭慧琴 任美艳 薛敏 王茅雁关键词:沙冬青 基因克隆