李明辉
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- 发文基金：吉林省科技厅科研基金吉林省杰出青年科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 去氢表雄酮通过调节丝／苏氨酸蛋白激酶信号传导通路抑制大鼠Morris肝细胞瘤生长
- 2009年
- 目的探讨去氢表雄酮（DHEA）的体内抗癌作用及其机制。方法Buffalo大鼠21只随机分为空白对照组、肿瘤对照组（把Morris肝细胞瘤移植到大鼠的两肋皮下，建立Morris肝细胞瘤移植的Buffalo大鼠的体内模型，基础饲料喂养）、DHEA肿瘤组（建立Morris肝细胞瘤移植模型后，在喂养的基础饲料中添加DHEA）和去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）肿瘤组（建立Morris肝细胞瘤移植模型后，在喂养的基础饲料中添加DHEAs）。分别喂养4周后，Westernblot和免疫组织化学方法检测磷酸化丝／苏氨酸蛋白激酶（Akt）、PTEN等蛋白的表达，流式细胞术检测大鼠CD3、CD4、CD8和CD4／CD8。单因素方差分析对数据进行处理。结果DHEA肿瘤组的肝细胞瘤的质量为（8．31±0．61）g，较肿瘤对照组的（14．57±0．56）g显著减轻（P〈0．05）。Westernblot及免疫组织化学染色结果显示，DHEA肿瘤组的磷酸化Akt蛋白表达量降低，而PTEN蛋白表达增强；CD3阳性细胞百分率（74．97％±8．29％）较肿瘤对照组（56．45％±6．12％）明显提高（t=4．92，P〈0．05），CD4／CD8比值升高（1．75±0．22）。而DHEAs肿瘤组CD3阳性细胞百分率（60．04％±6．69％）较空白对照组（75．38％±9．76％）明显降低（t=3．87，P〈0．05），同时CD4／CD8比值也降低（1．48±0．56）。结论DHEA对体内的肿瘤具有明显的抑制作用，此作用可能是其通过调节体内的Akt信号传导通路和免疫功能来完成的。
- 姜艳芳赵平伟秦俊杰李明辉松崎静司牛俊奇
- 关键词：蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶去氢表雄酮PTEN
- 人β_2糖蛋白1的重组表达及对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导内皮细胞产生ICAM-1的影响被引量：8
- 2006年
- 目的:探讨重组人β2糖蛋白1(hrβ2-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:应用pQE30表达载体表达hrβ2-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应用hrβ2-GP1处理前后的APS患者血清分别与内皮细胞株EA.hy926共孵育,细胞ELISA和RT-PCR方法分析处理前后EA.hy926表达ICAM-1的变化。结果:成功构建pQE30-hβ2-GP1,并对表达产物进行了纯化和鉴定,所获得的蛋白与预期的大小一致,并具有人β2-GP1的抗原性;rhβ2-GP1处理后的APS患者血清与处理前比较,与其孵育的内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1在蛋白和mRNA水平均明显降低,这种抑制作用随着rhβ2-GP1的浓度增加而逐渐增强。结论:抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1)促进内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1,hrβ2-GP1可中和此作用。
- 付嘉方艳秋徐立李明辉刘桂英姜艳芳段秀梅刘力华许淑芬谭岩
- 关键词：抗磷脂抗体综合征内皮细胞系
- 重组人β_2糖蛋白1第一结构域对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生ICAM-1、MCP-1的影响被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域(hrβ2GPⅠDⅠ)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子1(ICAM1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的影响。方法:应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,细胞ELISA和RTPCR方法分析处理前后HUVEC表达ICAM1、MCP1的变化。结果:hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理后的APS患者血清较处理前相比,与其孵育的HUVEC表达ICAM1、MCP1在蛋白和mRNA水平均明显降低。结论:hβ2GPⅠDⅠ可中和APS患者血清中的大部分致病性抗β2GPⅠ抗体(anti-β2GPⅠ)。
- 付嘉谭岩方艳秋徐立李明辉刘桂英姜艳芳段秀梅刘力华许淑芬
- 关键词：抗磷脂抗体综合征人脐静脉内皮细胞ICAM-1MCP-1
- hβ_2GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达
- 2006年
- 目的:构建h2βGPⅠ(h2βGPI)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β2GP-ⅠDI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,并在大肠杆菌M15中进行高效表达。方法:应用PCR技术扩增hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体β2GPⅠ-DI,并根据同尾酶特性构建hβ2GPⅠ第一功能区基因二串联体β2GPⅠ-DI2,将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序,测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中,构建成重组表达载体PQE30-β2GPⅠ-DI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,在大肠杆菌M15中以l mmol.L-1IPTG诱导蛋白表达,经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性。结果:表达了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白,相对分子质量约为9 000和17 000,其表达量均可达菌体总蛋白的25%,并具有hβ2GPⅠ的抗原性。结论:成功构建了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体,并诱导了蛋白的高效表达。
- 李明辉谭岩姜艳芳刘力华方艳秋许淑芬段秀梅付嘉
- 关键词：基因表达
- 去氢表雄酮通过Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡和细胞周期阻滞被引量：5
- 2007年
- 目的 研究去氢表雄酮（DHEA）及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）对HepG2和HT-29细胞抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期阻滞的作用。方法 应用MTT比色法检测不同浓度（1、10、50、100、200μmol／L）的DHEA或DHEAs与HepG2和HT-29细胞孵育8、24、48、72 h对两种细胞系的生长抑制作用;应用流式细胞术检测不同浓度的DHEA或DHEAs对细胞凋亡及细胞周期的变化;采用Western blot检测细胞内磷酸化Akt（Ser473,Thr308）蛋白的水平。结果 （1）不同浓度DHEA作用细胞24h时,HepG2的存活率24h时分别为92．7％±0．9%、84．7％±1．2％、62．4％±0．8％、49．5％±0．8％和50．7％±0．3％,HT-29细胞的存活率分别为92．5％±0.4％、89．5％±0．7％、80．5％±1．1％、67.5％±1.5％和70．6％±0．6％,与对照组相比,DHEA明显抑制HepG2和HT-29两种细胞的生长。在浓度为100μmol／L作用24 h时作用明显,而DHEAs对HepG2及HT-29细胞的增殖无明显影响。（2）100μmol／L的DHEA显著抑制两种细胞周期进程, HepG2细胞G0／G1期细胞比例显著升高,可以达到68．4％±2．0％,而对照组为48．6％±1．2％。HT-29细胞在100μmol／L时的G0／G1期的比率为90．3％±2．7％,而对照组仅为59．0％±1．2％,S及G2／M期细胞明显减少。（3）100μmol／L DHEA作用24 h时能显著诱导HepG2细胞凋亡（凋亡率为18．6％±2．2％）,而DHEAs却无此作用。（4）HepG2细胞在100μmol／L和200μmol／L DHEA作用24 h后,磷酸化Akt（Thr^308）、磷酸化Akt（Set^473）蛋白表达显著降低,这种作用在应用PI3K抑制剂和PI3K激活剂后分别被增强和消除。结论 DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用。而对于不同的肿瘤细胞系,DHEA可能通过调节Akt的信号通路来诱导细胞凋亡,还可能通过阻滞细胞周期,使其阻滞在G0／G1期。DHEAs对细胞的生长没有明显的作用。
- 姜艳芳赵平伟谭岩刘力华李明辉松崎静司牛俊奇
- 关键词：肝细胞细胞凋亡细胞周期肝细胞生长因子
