姜玉
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hsa-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体稳定感染BEAS-2B细胞株的建立被引量：2
- 2016年
- 目的建立稳定感染人hsa-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体的人支气管上皮(human bronchial epithelial,BEAS-2B)细胞株,为研究miR-100的功能奠定基础。方法根据hsa-miR-100-3p的成熟序列,设计其反向互补序列,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法扩增目的基因,将目的基因与慢病毒载体GV280经双酶切后,进行定向连接,产生GV280-hsa-miR-100-3p-inhibitor慢病毒表达载体。将制备好的重组慢病毒质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染人胚肾上皮细胞293(human embryo kidney epithelial cell,HEK-293)T细胞,包装产生病毒颗粒并以最适滴度感染BEAS-2B细胞以获得稳定感染的细胞株。倒置荧光显微镜观察感染效率,用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法检测重组慢病毒感染后BEAS-2B细胞中miR-100的相对表达量。结果测序结果表明,目的基因成功的连接到慢病毒载体上,重组慢病毒高效的感染了BEAS-2B细胞。RT-PCR检测发现,BEAS-2B细胞中miR-100的相对表达明显的下调了。结论稳定感染hsa-miR-100-3p抑制剂的BEAS-2B细胞株构建成功,敲低了细胞中内源性miR-100的表达。
- 董伟刘媛媛陈志军姜玉朱其苹汪思应
- 关键词：聚合酶链式反应慢病毒属微RNAS
- miR-155-5p慢病毒载体的构建及其对正常胃上皮增殖的影响被引量：1
- 2018年
- 目的构建过表达miR-155-5p慢病毒表达载体,建立稳定过表达miR-155-5p的GES-1胃上皮细胞株。在细胞水平上观察细胞增殖能力的变化。方法第一部分:PCR扩增获得miR-155-5p基因片段;将该基因片段与已线性化的病毒载体连接;将重组质粒转化到DH5α细胞,进行克隆分离、质粒DNA提取和DNA测序。第二部分:序列证实了的GV-369-has-miR-155-5p载体和p Helper 1.0以及p Helper2.0载体共同转染到293-T细胞,用于慢病毒的包装,然后进行慢病毒收获、浓缩与纯化。将纯化的miR-155-5p慢病毒用来感染细胞,经过嘌呤霉素筛选后建立稳定过表达miR-155-5p的GES-1细胞株。qRT-PCR检测细胞株中miR-155表达;Western blot检测KLF4蛋白表达及MTT法检测稳定表达miR-155-5p细胞的增殖。结果过表达miR-155-5p的重组慢病毒构建成功;miR-155在恶性程度较高的SGC-7901胃癌细胞株中高表达(P<0.05);建立了miR-155-5p稳定过2018-01-09接收表达的GES-1细胞株;过表达miR-155-5p抑制GES-1细胞中KLF4蛋白表达(P<0.05),且促进细胞增殖。结论miR-155可能通过负向调控KLF4表达,参与调控胃癌发生发展。
- 宋乐任海风刘亚坤姜玉赵荣荣魏道严汪思应
- 关键词：慢病毒载体微小RNA胃癌细胞
- 以Has-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体建立稳定感染A549细胞株被引量：1
- 2017年
- 目的用Has-miR-100-3p抑制剂的慢病毒来建立稳定感染人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株,为进一步研究miR-100在NSCLC细胞中的机制奠定基础。方法用has-miR-100-3p抑制剂的重组慢病毒液,以其最适浓度感染A549细胞,获得稳定感染慢病毒的A549细胞株。荧光显微镜观察细胞感染效率,实时定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)和流式细胞术(FCM)分别检测稳定感染慢病毒的A549细胞株中miR-100的表达量和细胞株中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况。结果荧光显微镜下可见绿色荧光在细胞中表达。qRT-PCR检测结果显示,感染抑制剂的A549细胞中miR-100的表达量显著减少;流式细胞术检测感染组细胞中均有GFP的表达。结论获得了has-miR-100-3p抑制剂的慢病毒稳定感染的A549细胞株,该细胞株中内源性miR-100的表达下调。
- 陈志军徐陌姜玉任海风赵荣荣杨帆汪思应
- 关键词：慢病毒
- 转录因子Runx2对人乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间充质转化能力的影响被引量：6
- 2019年
- 目的:建立稳定敲减Runt相关转录因子2(Runx2)表达的人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,探讨Runx2对MDA-MB-231细胞上皮-间充质转化(EMT)、转移和侵袭能力的影响。方法:利用LV-Runx2-RNAi慢病毒载体感染MDA-MB-231细胞,构建稳定低表达Runx2的MDA-MB-231细胞株,检测比较Runx2表达水平对MDA-MB-231细胞的形态及E-cadherin、N-cadherin、β-catenin和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响。侵袭实验和软琼脂集落形成实验分析比较抑制Runx2表达对乳腺癌细胞侵袭和非锚定生长能力的效应。结果:E-cadherin蛋白表达在敲减Runx2表达的MDA-MB-231细胞中明显高于常规MDA-MB-231细胞(P<0.05),而N-cadherin、β-catenin和MMP-9蛋白表达在敲减Runx2表达的MDA-MB-231细胞中明显低于常规MDA-MB-231细胞(P<0.05)。敲减Runx2表达的MDA-MB-231细胞侵袭和非锚定生长能力明显低于常规MDA-MB-231细胞(P<0.05)。结论:在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中抑制Runx2表达可以通过调控EMT相关蛋白的表达进而抑制乳腺癌细胞的EMT过程,从而对细胞的侵袭和转移起负调控作用。
- 张萍何晓刚徐晓丹张露刘雪刘亚坤刘亚坤姜玉汪思应
- 关键词：乳腺癌肿瘤转移上皮-间充质转化
- 饮酒通过内质网应激促进小鼠乳腺癌恶性进展
- 2017年
- 目的通过动物实验及体外实验探索饮酒是否促进乳腺癌恶性进展,且这一作用是否与其诱导的慢性应激有关。方法利用小鼠乳腺癌移植瘤模型,体内观察2%乙醇慢性处理的小鼠乳腺癌E0771细胞对体内细胞生长转移的影响;利用体外细胞学实验观察0.2%乙醇慢性诱导对小鼠乳腺癌细胞E0771增殖、迁移及非锚定生长能力的影响;同时用分子生物学方法探索细胞内ROS水平及慢性内质网应激蛋白如p-e IF2a、Bip、XBP1-s等蛋白表达水平是否发生改变。结果与对照组相比,饮酒组小鼠体内肿瘤生长速度加快,转移增加;体外酒精处理可以显著促进乳腺癌细胞增殖、迁移等恶性生物学行为,酒精慢性处理可以诱导ROS、内质网应激活化蛋白p-e IF2a、Bip、XBP1-s表达上升。结论饮酒可能通过诱导乳腺癌细胞内质网应激促进其恶性进展。
- 朱佩刘亚坤姜玉汪思应
- 关键词：酒精乳腺癌内质网应激小鼠
