刘琪
- 作品数：7 被引量：41H指数：4
- 供职机构：南京中医药大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 建泽泻鲨烯合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究被引量：4
- 2017年
- 泽泻鲨烯合酶(Ao SS)催化法呢基焦磷酸[(farnesyl diphosphate,FPP)]合成鲨烯,是碳源流向原萜烷型三萜生物合成的关键调节酶。为深入研究Ao SS基因的功能及表达,课题组将前期克隆获得的建泽泻鲨烯合酶基因(accession No.JX866770)的开放阅读框(ORF)构建到原核表达载体p Czn1上,并在大肠杆菌BL21(Roseta)中进行诱导表达,诱导表达出的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经纯化获得高纯度的目的蛋白;以此目的蛋白进行体外酶促反应验证其功能,其结果显示该目的蛋白具有催化法呢基焦磷酸生成鲨烯的活性;为进一步研究其表达规律,在此基础上,利用该蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体并纯化,ELISA检测抗体效价大于1∶51 200,Western blotting检测表明其具有较好的特异性;用制备得到的抗体免疫检测建泽泻Ao SS在不同组织中的表达情况,结果显示建泽泻块茎中Ao SS表达最高,其次为叶,根中表达甚微。原核表达载体的成功构建、基因功能的进一步验证及快速免疫检测方法的建立,为进一步开展Ao SS基因功能及其调控的研究奠定基础,为泽泻资源性成分原萜烷型三萜的合成生物学应用提供科学依据。
- 刘青芝谷巍吴启南巢建国桑晓华刘琪王小浩
- 关键词：鲨烯合酶原核表达免疫检测
- 基于ITS2序列的滨海白首乌及其近缘种DNA分子鉴定被引量：17
- 2018年
- 目的采用ITS2条形码鉴定滨海白首乌及其近缘种药用植物。方法采集滨海白首乌Cynanchum auriculatum及其近缘种植物样品共54份,分别提取基因组DNA,通过PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,测序结果提交至GenBank;从GenBank下载萝藦科植物16种47条序列,并通过ITS2数据库注释出ITS2序列;对提交与下载的101条序列,应用MEGA5.0软件进行序列比对,计算种内和种间距离,采用相似性搜索法、最近距离法进行鉴定分析,并构建neighber-joining(NJ)系统进化树直观反映鉴定结果。结果滨海白首乌ITS2序列长度均为249 bp,是1个单倍型,与萝藦科鹅绒藤属植物距离较近,与萝藦科其他属近缘种之间遗传距离较远,NJ树结果显示滨海白首乌及其近缘种药用植物均可明显区分,表现出良好的单系性,依据ITS2二级结构,也可以直观地将滨海白首乌与萝藦科近缘种区分。结论 ITS2序列作为DNA条形码能稳定、准确鉴别滨海白首乌,为保障安全用药提供了新的技术手段。
- 刘琪谷巍杨兵祁乃喜王小浩
- 关键词：萝藦科近缘种ITS2物种鉴定
- 栀子药材不同干燥方法水分动态过程模拟及其对多元活性成分的影响被引量：3
- 2019年
- 为了探讨热风干燥、红外干燥、真空干燥与干燥温度对栀子干燥过程水分脱除及成品品质的影响,本文采用Weibull分布函数对其干燥动力学曲线进行拟合,并测定其干燥成品中栀子苷、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ、京尼平-1-β-龙胆二糖苷的含量。结果表明:Weibull分布函数能较好地模拟栀子药材干燥过程(R^2=0.9936~0.9998),红外干燥过程属于降速干燥(β<1),真空干燥与热风干燥过程脱水速率呈现先升高后降低的趋势(β>1),尺度参数α随干燥温度升高而降低,不同干燥方式对尺度参数α也有较大影响,但随温度升高差异缩小。热风干燥、红外干燥、真空干燥干燥活化能分别为40.74、54.73、87.46 kJ/mol。在相同干燥方法下,随着干燥温度升高,西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ、京尼平-1-β-龙胆二糖苷呈升高趋势,栀子苷无明显升高或下降趋势;基于活性成分综合评价结果显示,50℃红外干燥方法得到的样品品质较佳,综合考虑干燥时间与干燥能耗,70℃红外干燥方法可作为栀子药材的适宜干燥方法。
- 王小浩朱邵晴谷巍巢建国刘琪田荣周晨王帆
- 关键词：栀子综合评价
- 东方泽泻实时荧光定量PCR内参基因的筛选及AoSS基因的组织表达特性分析被引量：4
- 2018年
- 【目的】筛选适用于东方泽泻实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的内参基因,并分析其鲨烯合酶基因(AoSS)的表达特性,为后续研究东方泽泻原萜烷型三萜生物合成调控及诱导机制打下基础。【方法】从东方泽泻转录组中选取内参基因18S rRNA、EF1α、GAPDH、ACT、UBQ和UBC,应用qRT-PCR检测其在不同组织和激素处理下的表达情况,并借助Delta CT、GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder对其表达稳定性进行分析评价。以筛选到的内参基因分析AoSS基因在不同组织中的表达情况。【结果】18S r RNA、GAPDH和EF1α基因在东方泽泻不同组织的表达稳定性较高,但18S rRNA、UBC和EF1α基因在不同激素处理下的表达稳定性均较高。以18S rRNA、GAPDH和EF1α基因为内参分析AoSS基因在东方泽泻不同组织中的表达量情况,结果显示,AoSS基因在东方泽泻不同组织中均有表达,其表达情况基本一致,均在东方泽泻块茎中表达量最高,其次是叶柄和叶,而在根中表达量最低。【结论】18S rRNA、GAPDH和EF1α基因是研究东方泽泻不同组织中基因表达分析的首选内参基因;18S rRNA、EF1α和UBC基因是研究激素处理下基因表达的首选内参基因。AoSS基因的表达具有组织特异性,其可能在东方泽泻的生长发育中发挥重要的调控功能。
- 刘青芝谷巍孙云飞吴启南巢建国桑晓华王小浩刘琪
- 关键词：内参基因
- 芡实精深加工研究进展被引量：7
- 2016年
- 芡实是我国重要的水生植物之一,既有丰富的营养价值,又有药用价值。芡实的种仁富含多种营养素,可作为食品加工的原辅料。此外,芡实的种皮、壳、叶柄和花梗富含多种活性成分,可作为活性成分制备的原材料。本文对近年来关于芡实脱壳技术、保鲜技术、干燥技术、大分子物质研究、副产物综合利用以及芡实食品的开发与研究进行了综述,为充分利用芡实资源提供理论依据。
- 薛峰孙锦杨刘琪潘苏华吴启南
- 关键词：芡实
- 卷柏StTPS基因克隆及其在复苏过程中的表达分析被引量：4
- 2018年
- 卷柏为典型极端耐旱的复苏药用植物,海藻糖在植物复苏过程中发挥重要作用,海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)是植物体内合成海藻糖的关键酶。该研究根据卷柏转录组数据拼接获得海藻糖-6-磷酸合成酶基因序列,以卷柏总RNA为模板合成c DNA,采用RT-PCR法克隆验证该序列,并进行生物信息学分析,结果显示该序列编码区长2 799 bp (St TPS,Gen Bank号MH155231),编码932个氨基酸,无信号肽,St TPS可能定位于叶绿体上且无跨膜结构,包含2个糖原磷酸化酶糖基转移酶(GPGTF)家族的保守结构域。在此基础上,模拟卷柏复苏(脱水和复水)过程,应用qRT-PCR进行其在复苏过程中的表达量分析,并同步采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定卷柏复苏过程中海藻糖含量变化。结果显示St TPS基因相对表达量及海藻糖含量均随着脱水时间的延长而增加,随着复水时间的延长而下降,且二者之间呈正相关,初步说明St TPS在卷柏复苏过程中发挥重要作用。
- 席彩彩谷巍孙红梅田荣刘琪王小浩
- 关键词：卷柏海藻糖海藻糖-6-磷酸合成酶QRT-PCR基因表达
- 泽泻法呢基焦磷酸合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究被引量：2
- 2018年
- 泽泻法呢基焦磷酸合酶[farnesylpyrophosphatesynthaseofAlismaorientale(Sam.)Juzep.,Ao FPPS]是泽泻原萜烷型三萜生物合成途径中的重要限速酶之一。为进一步研究Ao FPPS基因的表达及其功能,本研究将前期获得的泽泻法呢基焦磷酸合酶基因(accessionNo.HQ724508)插入到原核表达载体,构建重组表达载体p Czn1-Ao FPPS,转化BL21原核宿主菌,经诱导表达获得融合蛋白;利用Ni树脂亲和纯化技术对融合蛋白进行纯化获得高纯度的重组蛋白,并进行体外酶促反应以验证其功能,高效液相色谱结果表明Ao FPPS能够催化法呢基焦磷酸(farnesyl pyrophosphate, FPP)的合成。为进一步研究其表达规律,将该纯化后的重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测抗体具高效价,且Westernblot结果显示该抗体可特异性识别Ao FPPS蛋白,建立了Ao FPPS的快速免疫检测方法。本研究为揭示Ao FPPS在泽泻体内的作用机制及其基因的调控与表达奠定基础,为利用植物基因工程提高泽泻资源性活性成分含量、改善中药材品质提供科学依据。
- 周晨田荣谷巍耿超吴启南徐飞巢建国刘琪王小浩
- 关键词：泽泻原核表达免疫检测
