刘楠
- 作品数：11 被引量：39H指数：4
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- 刚地弓形虫ROP12蛋白的生物信息学分析被引量：11
- 2015年
- 目的通过在线生物程序分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白12(ROP12)的生物信息学特性。方法通过在线ProtParam、SOSUI、SOPMA、TMHMM、MotifScan及SYFPEITHI等程序,同时结合DNASTAR、DNAMAN生物信息学软件,分析TgROP12蛋白的生物学特性,如理化性质、二级结构、结构域及抗原表位等。结果TgROP12蛋白含有236个氨基酸,其为分子式C1125H1786N308O360S3,其分子质量和理论等电点分别为25.48ku和4.53。TgROP12蛋白具有信号肽序列和跨膜结构区域,其二级结构中β-转角和无规则卷曲分别占7.20%和44.92%;TgROP12蛋白含有8个亲水性较高(临界值为2.0)的区域,10个表面可及性较高(临界值为1.9)的区域;TgROP12蛋白含有保守结构区域和翻译后修饰位点各6个,并含有9个B细胞抗原表位和6个T细胞抗原表位。结论生物信息学分析显示TgROP12蛋白的免疫原性较好,可作为弓形虫病疫苗候选分子。
- 郭玲玲王春苗张进顺张晓磊贾晓晖姜文静刘楠
- 关键词：刚地弓形虫生物信息学
- 刚地弓形虫ROP10-ROP18真核表达载体的构建与鉴定被引量：3
- 2018年
- 目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白10(ROP10)、棒状体蛋白18(ROP18)复合基因真核表达载体pVAXDROP10-ROP18,并在HeLa细胞内表达目的蛋白。方法设计ROP10、ROP18基因特异引物,采用RT-PCR扩增ROP10、ROP18基因并测序,将ROP10和ROP18基因分别定向插入双启动子真核表达载体pVAXD的多克隆位点中,构建单价质粒pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18,然后将ROP18基因插入pVAXD-ROP10中构建双启动子真核表达载体pVAXD-ROP10-ROP18。经PCR和双酶切验证后将pVAXD-ROP10-ROP18转染至HeLa细胞内,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板分别进行ROP10基因和ROP18基因的RT-PCR鉴定;采用间接免疫荧光试验(IFA)检验ROP10和ROP18蛋白表达情况。结果成功克隆ROP10、ROP18基因片段并构建了重组质粒pVAXDROP10-ROP18,测序、双酶切和PCR验证重组质粒构建正确。分别将3种重组质粒转染至HeLa细胞后经RT-PCR鉴定,pVAXD-ROP10-ROP18组可同时扩增出1 761bp(ROP10基因)和1 665bp(ROP18基因)2个片段,而pVAXDROP10组和pVAXD-ROP18组分别扩增出1 761bp和1 665bp的目的片段;IFA显示pVAXD-ROP10组和pVAXDROP18组均有绿色荧光,即分别表达ROP10和ROP18蛋白。结论成功构建重组质粒pVAXD-ROP10-ROP18、pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18质粒可在真核细胞中分别表达ROP10和ROP18两种蛋白。
- 刘荣荣张晓磊张进顺贾晓晖刘楠
- 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达载体
- 刚地弓形虫ROP12蛋白的生物信息学分析
- 目的 通过在线生物程序分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白12(ROP12)的生物信息学特性，为ROP12 基因的后续研究奠定基础。方法 通过在线的生物程序，如ProtParam、SOSU、SO...
- 郭玲玲王春苗张进顺张晓磊贾晓晖姜文静刘楠
- 关键词：刚地弓形虫生物信息学分析
- 刚地弓形虫ROP16基因的克隆及生物信息学分析被引量：7
- 2016年
- 目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白16(TgROP16)真核重组表达载体,对TgROP16基因编码蛋白进行生物信息学分析。方法提取刚地弓形虫总RNA,根据TgROP16基因的开放阅读框架设计引物,采用逆转录PCR(RTPCR)扩增ROP16基因,经EcoR I、Not I酶切后连接入真核表达载体pVAX1中,连接产物转化大肠埃希菌(E.coli)XL1-Blue。提取阳性菌落质粒,进行PCR、双酶切鉴定及基因测序,对所获序列进行生物信息学分析。结果 TgROP基因RT-PCR扩增产物与预期一致,大小约为2 100bp。重组质粒经PCR及双酶切鉴定构建正确。测序显示获得的TgROP16基因片段为2 124bp,与GenBank已收录的弓形虫ROP16基因序列(登录号为GQ249093.1)比对,一致性为99.8%。预测其编码蛋白TgROP16为非跨膜分泌蛋白,含707个氨基酸,分子式为C3343H5339N967O1024S2,分子质量单位为76.1352ku,理论等电点为9.18;在TgROP16蛋白的二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占比35.79%、14.29%、7.07%和42.86%;含多个可形成卷曲螺旋构象的区域与可成为磷酸化位点的氨基酸残基,存在信号肽序列,含39个B细胞抗原表位、24个CTL细胞抗原表位及33个Th细胞抗原表位。结论成功构建了pVAX1-ROP16真核表达重组质粒,生物信息学分析表明其编码蛋白TgROP16具有良好的抗原性及免疫原性,有望作为弓形虫疫苗候选分子。
- 刘楠郭玲玲张进顺张晓磊刘荣荣
- 关键词：刚地弓形虫真核表达生物信息学分析
- 刚地弓形虫ROP18基因的克隆及生物信息学分析被引量：21
- 2015年
- 目的对刚地弓形虫RH株的棒状体蛋白18(TgROP18)基因进行克隆,同时采用生物信息学分析TgROP18蛋白序列。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgROP18基因(GenBank登陆号为AM075204)的开放阅读框设计引物,采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增ROP18基因,并对其产物进行测序;采用在线生物软件预测TgROP18蛋白的结构与功能。结果 TgROP18基因RT-PCR扩增产物与预期一致,大小为1 665bp;测序分析显示,ROP18基因序列与GenBank上已发表的序列完全一致。TgROP18蛋白含有554个氨基酸,分子式为C2753H4405N801O811S20,分子质量单位为62.34ku,理论等电点为9.34;在TgROP18蛋白的二级结构中,α-螺旋、β-折、β-转角、无规则卷曲所占比例分别为41.52%、19.13%、7.76%和31.59%;TgROP18蛋白含有10个亲水性较高的区域(临界值为2.0),28个表面可及性较高的区域(临界值为1.9),10个保守结构区域,7个翻译后修饰位点,21个B细胞抗原表位,21个CTL抗原表位及26个Th抗原表位有。结论生物信息学分析表明,TgROP18蛋白具有良好的免疫原性,这将为弓形虫疫苗的研究提供基础资料。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠朱晓波
- 关键词：刚地弓形虫克隆真核表达质粒生物信息学分析
- 饲养密度对小鼠福利的影响
- 目的 研究不同的饲养密度对小鼠福利的影响，从而为更好的满足实验动物的福利。方法 挑取5 周龄雌性BALB/c 小鼠，按照随机原则分为6 个组，在不同的饲养密度下饲养，观察各组小鼠的体重、生活习性、血液等变化。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖刘楠
- 关键词：BALB/C小鼠饲养密度动物福利
- 刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建被引量：3
- 2015年
- 目的 PCR扩增刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因,构建真核表达载体pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达。方法 ROP18基因和质粒pVAX1分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,在T4连接酶作用下连接过夜,将连接产物转化至大肠埃希菌E.coil XL1-Blue感受态细胞,经菌落PCR、双酶切及测序正确的重组质粒pVAX1-ROP18转染至HeLa细胞内。试验设空白对照组和pVAX1空质粒对照。提取各组HeLa细胞的总RNA并将其逆转录成cDNA,分别进行管家基因β-actin和ROP18基因的RT-PCR扩增;采用Western blot法检测转染后各组细胞ROP18蛋白的表达情况。结果经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,ROP18基因的RT-PCR扩增片段大小为1 665bp,与预期值相符;ROP18基因重组质粒转化菌菌落PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定,大小为1 665bp,与预期值相符;双酶切重组质粒得到预期酶切片段;重组质粒的目的基因序列与弓形虫RH株ROP18基因(登录号AM075204.1)序列比对完全一致。脂质体转染后各组β-actin的RT-PCR扩增目的片段均为613bp,与预期值相符;pVAX1-ROP18重组质粒转染组的ROP18的RT-PCR扩增目的片段大小为1 665bp,而其他组无该目的基因条带。Western blot检测重组质粒pVAX1-ROP18能够在HeLa细胞内表达ROP18蛋白。结论成功构建了真核表达载体pVAX1-ROP18,且该重组质粒能够在真核细胞内表达ROP18蛋白。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠
- 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达
- 刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建
- 目的 克隆刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因并构建重组质粒pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达情况.方法 ROP18 基因和质粒pVAX1 分别经Hind Ⅲ 和...
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠
- 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达
- 刚地弓形虫ROP16-ROP18复合基因真核表达载体的构建及其免疫保护性研究
- 刚地弓形虫（Toxoplsma gondii）是世界上最常见的寄生虫之一，属于专性细胞内寄生的顶复门原生动物寄生虫，可寄生在人和各种脊椎动物当中。由于其感染人体可以造成怀孕妇女流产或死胎、胎儿畸形等疾病以及会使免疫缺陷患...
- 刘楠
- 关键词：刚地弓形虫真核表达载体免疫保护性
- 文献传递
- 刚地弓形虫ROP16-ROP18复合基因真核表达载体的构建被引量：8
- 2017年
- 目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白16(TgROP16)、棒状体蛋白18(TgROP18)复合基因真核表达重组质粒,并验证其在真核细胞中的表达情况。方法重组质粒pVAX1-ROP16与pVAX1-ROP18分别经EcoRⅠ和NotⅠ、NheⅠ和AflⅡ双酶切,将ROP16与ROP18基因先后克隆至双启动子真核表达载体质粒pVAXD的多克隆位点中,构建pVAXD-ROP16-ROP18重组质粒。分别用双酶切和PCR验证正确的重组质粒及对照组质粒转染Hela细胞,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板进行ROP16基因、ROP18基因与管家基因β肌动蛋白基因的RT-PCR扩增,采用间接免疫荧光法检测各自基因的表达。结果重组质粒pVAXD-ROP16-ROP18经PCR及双酶切鉴定构建正确。转染后经RT-PCR检测,实验组与对照组β-肌动蛋白基因扩增产物均与预期大小相符,实验组ROP16基因、ROP18基因扩增产物分别为1 700bp和2 100bp,与预期大小相符,而对照组均未扩增出ROP16及ROP18基因。间接免疫荧光法检测显示,重组质粒pVAXD-ROP16、pVAXD-ROP18转染组细胞可见绿色荧光,空质粒及对照组无绿色荧光。结论成功构建了重组质粒pVAXD-ROP16-ROP18,该质粒可在真核细胞中表达。
- 刘楠张晓磊郭玲玲张进顺贾晓晖刘荣荣
- 关键词：刚地弓形虫真核表达
