王旭彤
- 作品数：12 被引量：49H指数：5
- 供职机构：东北林业大学林学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金博士科研启动基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 暴马桑黄MVD基因cDNA全长克隆及表达特性分析被引量：4
- 2020年
- 【目的】对暴马桑黄中参与三萜合成途径的关键酶——甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶(MVD)基因进行克隆及表达特性分析,以了解暴马桑黄三萜合成的调控机制。【方法】利用生物信息学软件对MVD基因cDNA序列进行分析,并采取同源重组方法构建原核表达载体。用qRT-PCR技术分析MVD基因在暴马桑黄不同发育阶段表达特性;以分光光度计法测定暴马桑黄在不同发育阶段的三萜含量和变化规律。【结果】暴马桑黄MVD基因cDNA序列全长1209 bp,编码402个氨基酸,相对分子质量为43.43 ku,命名为SbMVD(登录号为MK977617)。系统进化树表明:暴马桑黄MVD蛋白和紫芝、灰树花MVD蛋白同源性最高。SDS-PAGE结果显示:在65 ku(包含21 ku标签蛋白)附近出现与预期大小一致的目的蛋白条带。qRT-PCR分析及三萜含量测定结果表明:暴马桑黄SbMVD基因转录水平和三萜含量在不同发育阶段呈先升后降的变化趋势,并且两者变化趋势基本一致。【结论】通过对SbMVD基因的克隆及表达特性分析,推测该基因在三萜合成途径中发挥一定作用,为进一步研究该基因在暴马桑黄三萜合成过程中的功能奠定了基础。
- 刘增才孙婷婷王世新马依莎王旭彤孙健邹莉
- 松杉灵芝分离纯化及ITS分子鉴定被引量：6
- 2016年
- 以采自黑龙江省大兴安岭图强地区的野生松杉灵芝为试验材料,采用组织分离法分别对其菌盖处、菌盖与菌柄交界处和菌柄处的组织进行分离纯化;通过测定生长速度和污染率等方法,研究分离纯化的最适培养基和最佳部位;最后将分离物进行ITS序列分析,计算遗传距离,并采用邻接法构建NJ系统发育树。结果表明,分离纯化最适培养基为PDA+子实体煮水培养基;菌盖与菌柄交界处为最佳分离部位,菌丝生长速度快,菌丝长势好,污染率低;分离物经ITS序列测定,系统发育分析证实其为松杉灵芝。本研究获得了松杉灵芝的纯培养菌株,为松杉灵芝的进一步开发利用提供科学依据。
- 邹莉孙婷婷王旭彤方释慧王世新崔嵘
- 关键词：松杉灵芝ITS序列分析系统发育分析
- 丝状真菌遗传转化体系及筛选技术的研究进展被引量：8
- 2020年
- 目前,丝状真菌已经广泛应用于工业、农业、医药等领域,随着基因时代的发展,大量丝状真菌基因组序列公布,丝状真菌的基因功能研究和菌种改造也成为现今分子生物学的热点,但是这些研究都需要高效稳定的遗传转化体系来支撑。然而现有的遗传转化方法仍存在转化效率较低、筛选阳性困难等问题。为了在大量转化受体中筛选阳性转化子,快速准确的检测阳性转化子在遗传转化研究中具有至关重要的作用。综述了目前广泛使用的丝状真菌遗传转化体系的构建方法以及从核酸、蛋白质、生物学特性等方面鉴定丝状真菌阳性转化子的检测方法,为从分子水平研究丝状真菌的基因功能、改良菌种奠定基础。
- 王越李雅凝曲晓磊王旭彤
- 关键词：丝状真菌
- 黑木耳内切葡聚糖酶基因克隆与原核表达被引量：9
- 2019年
- 克隆了黑木耳(Auricularia auricular-judae)内切葡聚糖酶(endoglucanase)基因并进行序列分析,此外,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达。研究基于前期测得的黑木耳转录组数据,同时结合基因组数据(GenBank登录号为NEKD00000000.1),筛选到黑木耳内切葡聚糖酶基因序列并设计特异引物,以黑木耳菌丝总RNA为模板,采用RT-PCR技术克隆黑木耳内切葡聚糖酶基因cDNA全长,命名为Aa-eg,构建了重组原核表达载体pET32a-Aa-eg并成功在大肠杆菌中表达。序列分析表明,cDNA全长为1242bp,编码413个氨基酸,预测该蛋白分子量为43.59ku,理论等电点为4.42,存在信号肽。由于pET-32a载体包含20.0ku的标签,SDS-PAGE分析在45.0ku和66.2ku之间出现目的蛋白条带,与理论预期值大小一致。通过对黑木耳内切葡聚糖酶基因的克隆及分析,为进一步揭示黑木耳内切葡聚糖酶基因功能奠定基础。
- 孙健孙婷婷王旭彤邹莉
- 关键词：黑木耳内切葡聚糖酶生物信息学分析原核表达
- 小兴安岭林下利用木耳菌糠栽培元蘑关键技术被引量：1
- 2018年
- 元蘑(Hohenbuehelia serotine)是东北地区传统的食用菌,具有极高的营养价值和药用价值。林下食用菌栽培是发展林下经济重要内容之一,根据多年来的实践经验,总结了在小兴安岭地区林下元蘑的生长发育条件、林下栽培、采收等各环节的技术要点及技术规范。利用木耳菌糠林下栽培元蘑,既可节约农业用地,提高元蘑品质,又能降低生产成本,减少食用菌栽培过程中对林业资源的消耗,缓解菌林矛盾,还为进一步利用木耳菌糠发展高效生态林业和循环经济提供了科学依据。
- 王旭彤王显君曹志和黄国华明秀英许泽成邹莉
- 关键词：元蘑林下栽培
- 花椒精油的挥发性化学成分及其香气进展被引量：5
- 2015年
- 以花椒精油的挥发性化学成分及其香气组分为出发点,综述了花椒精油的香气差异。香气的表征方法有气相色谱法、液相色谱法、气相色谱—质谱法、感官香气评价法、电子鼻技术等。精油香气的应用主要为微胶囊香精、空气清新剂、香水等领域。利用易降解、环境友好型纤维素气凝胶的吸附性能制备花椒精油/纤维素气凝胶是有待研发的一个方向。
- 王旭彤王海英马丽娜高欣妍李书杨
- 关键词：花椒精油香气
- 富集黄酮的鸡腿菇栽培及营养成分分析被引量：6
- 2020年
- 通过筛选鸡腿菇(Coprinus comatus)培养基配方,以提高其生产效率。通过比较红糖、马铃薯-葡萄糖-麦粒、玉米粉3种配方对菌丝体生物量、培养液外观、菌丝球生长状态和营养成分的影响,筛选鸡腿菇最适液体种配方。分别对比菌丝在以麦粒、玉米芯及豆秸为主要成分的培养料中的生长速度及状况,选出最适原种配方(质量分数):豆秸88%,麦麸10%,过磷酸钙1%,生石灰1%。在原种培养基中分别添加质量分数为0%、4%、8%的玉米须,进行出菇试验,并对鸡腿菇子实体形成、商品性状、产量及营养成分进行比较分析。结果显示,最适的液体种配方为玉米粉配方,最适的原种配方为麦粒配方。添加玉米须的栽培种配方栽培出的鸡腿菇商品性状、生物转化率以及各种营养成分均优于对照组;添加4%玉米须的配方综合表现较理想,其生物转化率达91.58%,黄酮含量比对照组提高91.52%,从覆土到子实体成熟平均用时为35.15 d,与对照差异不显著。玉米粉液体配方、麦粒原种配方,添加4%(质量分数)玉米须的栽培种配方可作为鸡腿菇高产高效的培养基配方推广使用。
- 邹莉马依莎孙健王世新王旭彤刘增才
- 关键词：鸡腿菇营养成分
- 桑黄鲨烯环氧酶基因原核表达及过表达载体的构建被引量：2
- 2018年
- 目的构建桑黄三萜生物合成途径中的关键酶——鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因的原核表达和过表达载体。方法将克隆到的桑黄SE基因构建到原核表达载体p ET-32a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),使用异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达2~10 h后,通过SDS-PAGE进行检测。根据Gen Bank中提交的香菇3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)启动子序列设计引物,利用PCR技术克隆获得香菇gpd启动子片段,以植物双元表达载体p CAMBIA1301为基础载体,通过酶切、连接等方法将其中的35 S启动子替换为香菇gpd启动子,再将SE基因编码区序列构建到gpd启动子下游,构建桑黄SE基因的过表达载体。结果成功构建了SE基因的原核表达载体p ET-32a-SE,SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约为55 000,与预测的蛋白相对分子质量基本一致。PCR检测、酶切鉴定和测序分析可知,成功构建了适宜食用菌遗传转化的中间载体p CAMBIA1301-gpd-gpd及SE基因的过表达载体p CAMBIA1301-gpd-gpd-SE。结论为后期研究SE基因在桑黄三萜生物合成方面所发挥的功能奠定基础。
- 孙婷婷孙煦茵王旭彤王世新刘增才邹莉
- 关键词：原核表达PCR
- 黑木耳三萜合成关键酶基因的挖掘被引量：1
- 2020年
- 黑木耳有着极高的药用价值,多项研究表明三萜类化合物是其中重要的作用成分。在黑木耳转录组的基础上,结合黑木耳基因组信息,运用生物信息学深入研究黑木耳在三萜类化合物合成过程中关键酶基因。结果表明:共发现14个参与黑木耳三萜MVA合成途径的候选基因,其中包括4个AACT基因,1个HMGS基因,1个HMGR基因,1个PMK基因,3个FPPS基因,1个SQS基因以及3个LS基因。93个Unigenes(约0.82%)被注释为参与三萜类化合物形成的2条代谢通路,并且对已鉴定基因的同源性进行比较,进一步探索了可能参与黑木耳三萜类化合物合成的候选基因。
- 邹莉孙煦茵齐琪王旭彤孙婷婷
- 关键词：黑木耳三萜类化合物
- 桑黄原生质体的制备与再生被引量：4
- 2019年
- 为了优化桑黄(Phellinus igniarius)原生质体制备与再生体系,以桑黄DL101的菌丝体为材料,利用Design-Expert 8.0.6软件进行二次回归分析对参数酶解温度、酶解时间、酶的浓度等进行了系统的优化研究,此外,采用不同的再生培养基对桑黄原生质体的再生进行了研究。获得了制备桑黄原生质体的最佳酶系统、酶解时间以及酶解温度,分别为0.5%崩溃酶+2.0%溶壁酶、酶解3.0 h、酶解温度30℃,此时,原生质体得率最高,为1.49×107个/mL;此外,0.6 mol·L-1硫酸镁作为再生渗透压稳定剂时桑黄原生质体的再生率最高,可达到0.67%。桑黄DL101原生质体制备与再生体系的建立,为提高桑黄在后续分子遗传转化、菌种改良、基因编辑等奠定了良好的基础。
- 孙婷婷王世新王旭彤刘增才马伊莎邹莉
- 关键词：原生质体制备原生质体再生响应曲面法
