- TTA1-Tat-PEG-GS NPs结合siRNA-EGFR转染C6细胞抑制EGFR基因表达的研究被引量：1
- 2016年
- 目的探讨TTA1、Tat、聚乙二醇(PEG)修饰的明胶硅氧烷纳米粒子(GS NPs)结合siRNA-EGFR转染C6细胞,抑制其表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法根据鼠EGFR的mRNA序列设计合成siRNA-EGFR以及阴性对照siRNA-Scr(无意义序列)。TTA1-Tat-PEG-GS NPs通过静电作用结合siRNA。实验分4组:Control组、TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-Scr组、TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-EGFR组及X-tremeGene/siRNA-EGFR组。除Control组外,其余三组均在体外对C6细胞进行转染。Real-time PCR、Western blot分别检测细胞EGFR mRNA及蛋白表达情况;CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果与Control组及TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-Scr组比较,TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-EGFR组在体外细胞水平上能有效抑制C6细胞EGFR mRNA及蛋白的表达(P<0.01),同时抑制C6细胞的增殖(P<0.05或P<0.01)并促进其凋亡(P<0.01)。此外,X-tremeGene/siRNA-EGFR组和TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-EGFR组在下调C6细胞EGFR水平、抑制细胞增殖及促进细胞凋亡方面差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TTA1-Tat-PEG-GS NPs可能成为一种新型的基因治疗载体,为胶质瘤基因治疗的进一步研究提供理论依据。
- 胡洋张龙李旺魏峰丰伟田新华
- 关键词：基因载体
- 双荧光标记的胶质瘤原位移植瘤模型的建立被引量：2
- 2017年
- 目的建立一种稳定、可实时监测的胶质瘤原位移植瘤裸鼠模型。方法用带有荧光素酶(luciferase-Luc)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein-GFP)基因的慢病毒感染U251神经胶质瘤细胞,流式细胞仪筛选稳定表达GFP-Luc荧光的细胞系,并通过CCK-8实验、细胞周期实验、Transwell肿瘤迁移及侵袭实验等评价荧光细胞的增殖、迁移和侵袭能力是否改变;将细胞接种至裸鼠大脑尾状核,建立胶质瘤原位移植瘤模型,利用小鼠活体成像系统监测脑内肿瘤的生长情况,并通过石蜡切片,HE染色评价细胞在裸鼠脑内的病理特征及成瘤能力。结果成功构建稳定表达GFP荧光和luciferase荧光的U251胶质瘤细胞系及动物模型,慢病毒整合并未改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力;模型生长周期适中,成瘤率高,瘤体在颅内生长稳定,HE切片符合人胶质瘤特征。结论双荧光标记的胶质瘤细胞相比于传统细胞更有利于胶质瘤动物模型的实验研究;U251-GFP-Luc胶质瘤细胞裸鼠模型,其肿瘤生长和病理特性与人胶质瘤相似,且可实时观察肿瘤生长,可作为胶质瘤实验研究的理想动物模型。
- 李旺黄焱田新华李良成穆军博童俊江
- 关键词：神经胶质瘤荧光活体成像原位移植
