周韬
- 作品数：14 被引量：54H指数：5
- 供职机构：中南林业科技大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家林业公益性行业科研专项湖南省研究生科研创新项目更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程生物学医药卫生更多>>
- 蚬壳花椒种子萌发特性研究被引量：4
- 2014年
- 目的:建立解除蚬壳花椒种子休眠和萌发的有效方法,提高蚬壳花椒种子萌发率。方法:以恒温4℃、恒温25℃、变温(先4℃层积35 d,后25℃层积35 d)湿沙层积70 d处理蚬壳花椒种子,每隔7 d进行1次取样,测定种子内营养物质含量和酶活性,分析各处理解休眠效果,探索最佳层积温度。以层积处理后的种子用不同发芽基质(湿沙、草炭、珍珠岩、土壤)进行拌种处理,探索最适宜发芽基质。结果:变温层积可以有效解除蚬壳花椒种子休眠;草炭拌种可以大幅提高种子萌发率到68%。结论:变温层积可以加速蚬壳花椒种子内营养物质的水解,提高种子内酶活性,促进种子内生理代谢反应。
- 费明亮王平周韬程鹏
- 关键词：酶活性
- Cd胁迫下生物质高粱SoHMA3基因克隆及表达分析
- 2021年
- 重金属转运P1B型ATP酶对促进金属离子的吸收、运输、积累、分配和解毒至关重要。其中HMA3蛋白可能通过将镉螯合至液泡从而有助于金属解毒,本研究以不同浓度Cd处理生物质高粱幼苗为材料,克隆获得了SoHMA3基因的全长序列,cDNA全长3179 bp,编码877个氨基酸,编码蛋白的理论分子量为94.44 kD,理论等电点为6.4,为跨膜蛋白,该蛋白属于HAD超家族成员,对该氨基酸序列进行聚类分析表明,其与玉米和水稻的同源性最高,而与芦笋最低。实时定量PCR分析表明,SoHMA3基因在生物质高粱地上部和地下部均有表达,不存在组织特异性;镉胁迫下,该基因在地上部无显著响应,在地下部有显著响应,表明生物质高粱SoHMA3的表达受到Cd胁迫的影响,参与了生物质高粱对Cd的解毒。本研究结果为进一步探究生物质高粱对Cd的吸收、转运及解毒机理提供基础资料。
- 吴艳王平周韬周韬凌定勋孙吉康
- 关键词：镉基因表达
- 蚬壳花椒ZdICL基因的克隆表达以及种子萌发过程中表达量变化
- 2018年
- 目的克隆表达蚬壳花椒种子萌发过程中油脂代谢关键调控基因,研究该基因在蚬壳花椒种子外源激素赤霉素(GA)促萌发下调控蚬壳花椒种子人工萌发分子机制。方法根据蚬壳花椒转录组测序结果,筛选克隆油脂代谢关键基因,并利用原核表达体系表达纯化目的蛋白,对其编码产物进行生物信息学分析和预测。种子萌发实验分为清水对照组与GA促萌发实验组,设定0、6、12、24、48 h为萌发取样点,相对荧光定量分析该基因表达量变化。结果通过克隆该基因片段及序列分析,确定该基因编码异柠檬酸裂解酶(ICL),将其命名为ZdICL。该基因开放阅读框全长为1 728 bp,编码产物包含575个氨基酸。构建原核表达载体pET-28a-ZdICL,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,对该基因编码产物的氨基酸序列进行聚类分析表明,其与甜橙同源性最高,而与模式生物拟南芥同源性最低。在种子萌发过程中其表达量在GA促萌发过程中第48小时前逐步降低,到第48小时表达量升高,与外源激素GA对种子萌发过程中脂肪动员代谢调控相吻合。结论通过对ZdICL基因进行克隆表达以及表达量分析,初步认为蚬壳花椒种子自然繁育率低下的原因之一可能是自身内源激素GA含量不足,导致ICL活性不足,无法有效保护种子抵御氧化损伤,致死种现象较多,同时为探索该基因在蚬壳花椒种子萌发过程中的调控功能奠定基础。
- 周韬荣健孙吉康王平李强
- 关键词：克隆原核表达大肠杆菌
- 蚬壳花椒GID1同源基因克隆及其在种子萌发过程中的表达分析被引量：6
- 2017年
- GID1是赤霉素信号通路关键调控基因,其通路主要影响种子萌发和植物生长。本文以高通量测序构建的蚬壳花椒(Zanthoxylum dissitum)cDNA文库为参考,克隆了蚬壳花椒3个GID1同源基因ZaGID1a、ZaGID1b、ZaGID1c。利用生物信息学对蚬壳花椒GID1同源基因的核酸序列及氨基酸序列进行分析,表明3个同源GID1序列编码的蛋白功能区域、理化性质、系统发育、亲疏水性、亚细胞信号肽定位、三级结构预测等各项生物信息学信息均指向赤霉素受体蛋白功能。同源GID1序列在蚬壳花椒种子人工萌发过程中的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)表达量分析研究表明,ZaGID1a、ZaGID1c可能对蚬壳花椒种子萌发起关键调控作用,ZaGID1b与种子萌发过程的关系不明显。
- 周韬王平孙吉康李猛
- 关键词：克隆生物信息学
- 蚬壳花椒种子萌发时期内参基因的筛选与验证被引量：1
- 2018年
- 为了解蚬壳花椒种子萌发的分子机制,需要筛选蚬壳花椒种子萌发时期表达稳定的内参基因。该研究通过赤霉素处理种子促进萌发,以不同萌发阶段的蚬壳花椒种子为材料,采用实时荧光定量PCR技术分析了6个候选内参基因GAPDH、ACT、18SrRNA、UBQ5、TUA和CYP在蚬壳花椒种子萌发时期的表达稳定性。结果表明:(1)α-淀粉酶基因、DELLA基因和异柠檬酸裂解酶基因分别反应了种子萌发阶段糖、激素和脂肪的代谢活动,因此选择蚬壳花椒异柠檬酸裂解酶基因(Unigene0032088)、α-淀粉酶基因(Unigene0033597)和DELLA基因(Unigene0058868)作为验证基因进行相对表达量验证。(2)综合geNorm、NormFinder和BestKeeper的分析结果显示在蚬壳花椒种子萌发过程中ACT表达稳定性最好,UBQ5次之。(3)以ACT、UBQ5基因为内参基因的结果显示验证基因的表达量与种子萌发生理状态一致,初步揭示了GA处理的种子易于萌发而清水处理的种子在萌发第3天容易腐败这一现象出现的可能原因。综上所述,ACT是蚬壳花椒种子萌发时期最合适的内参基因,其次是UBQ5。
- 孙吉康王平贾浩周韬吴艳
- 关键词：种子萌发实时荧光定量PCR内参基因基因表达
- 单面针根和叶的代谢组比较研究被引量：6
- 2018年
- 中药材单面针其根、茎、叶均可入药,但其根茎部与叶片之间存在较大的成分差异。为研究单面针根、茎、叶不同成分相关的代谢物的合成路径,本文采用用气相色谱-质谱法研究根与叶的代谢组差异。根与叶的代谢组数据分析表明叶中的谷胱甘肽合成代谢以及三羧酸循环代谢的活跃度高于根;根与叶中生物碱类和类黄酮物质的合成各有偏重,但从已鉴定的代谢物的种类及其功能看,具有抗菌、消炎的成分多存在于根中;相对于根而言,叶中富含儿茶素、柚皮素等有清除自由基、抗氧化功能的活性成分。从而得出根茎部有效成分含量高于叶,但可以从清除自由基、抗氧化功能角度开发叶的利用价值。
- 贾浩孙吉康王平周韬吴艳
- 关键词：GC-MS
- 盐碱胁迫对植物种子萌发的影响及生理生化机制研究进展被引量：13
- 2015年
- 土壤盐渍化是影响农业生产和生态环境的重要非生物因素,也是目前制约着我国农业增产的两大土壤因素之一,土壤盐渍化由于其高盐且高碱环境对包括种子萌发在内的植物生长发育具有重要影响。现总结了盐胁迫和碱胁迫对种子萌发的影响规律,并初步分析了盐碱胁迫对种子萌发影响的生理生化机制,用以指导生产和进一步开展相关研究提供参考。
- 代明龙王平孙吉康周韬
- 关键词：盐胁迫碱胁迫发芽势
- 东南景天转运Cd蛋白HMA3基因载体的构建及栾树遗传转化体系的建立被引量：1
- 2022年
- 【目的】构建栾树遗传转化体系并通过转入东南景天HMA3基因对复羽叶栾树的基因进行定向改良,以提升其对镉(Cd)的富集能力与转运能力,为之后复羽叶栾树逆境抗性分子机制的研究提供基础。【方法】制备复羽叶栾树单细胞悬浮液,检测其基因组的大小;构建表达载体并转入农杆菌中,调节激素配比诱导复羽叶栾树形成愈伤组织,并通过农杆菌介导进行遗传转化;将筛选得到的阳性愈伤组织制备成原生质体,并用激光共聚焦观察;最后通过Cd胁迫试验检测栾树对Cd的富集能力与转运能力。【结果】通过与内参番茄的比较发现栾树的基因组大小约为335 Mb;在诱导复羽叶栾树愈伤组织时,加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)可以有效地防止愈伤组织发生褐化,加入10%椰汁后,复羽叶栾树愈伤组织的诱导成功率及生长速度均达到最佳;激光共聚焦观察复羽叶栾树阳性愈伤组织发现HMA3定位在细胞膜上;Cd胁迫试验显示,转入HMA3基因的复羽叶栾树,其Cd的富集系数提升了40.3%,转运系数提升了29.3%。【结论】复羽叶栾树较小的基因组决定了其在遗传过程中,有更大的可能保留外源基因,有效避免了外源基因的丢失;PVP及椰汁的加入大幅提升了复羽叶栾树愈伤组织诱导的成功率,并有效较少了愈伤组织的褐化;转入的HMA3成功在细胞膜上表达,对转基因复羽叶栾树的富集能力和转运能力都有显著提升。
- 周韬白磊何其浩王平
- 关键词：遗传转化体系
- 镉胁迫对栾树幼苗不同组织部位转录组差异研究被引量：4
- 2022年
- 随着重金属镉(Cd)污染日趋严重,找寻高效土壤Cd污染治理方法刻不容缓.以具有植物恢复潜力的栾树(Koelreuteria paniculata)作为研究对象,通过转录组学RNA-Seq测序研究不同浓度Cd胁迫后栾树地上部与根部基因表达与代谢通路的变化.转录组测序结果表明,共获得了65171条Unigenes,根中差异表达的基因显著多于茎叶,且下调表达的基因多于上调表达基因.GO富集结果表明,在Cd胁迫下细胞内核糖核蛋白复合物(Intracellular ribonucleoprotein complex)、核糖核蛋白复合物(Ribonucleoprotein complex)和大分子复合物(Macromolecular complex)是栾树根部差异表达基因主要富集部分.在地上部中,差异表达基因主要富集在膜内组分和膜部分.KEGG途径富集分析表明,在根部中核糖体(Ribosome)、吞噬体(Phagosome)和三羧酸循环(Citrate cycle(TCA cycle))是主要的富集途径.在叶中,植物激素信号转导通路显著富集.转录因子鉴定结果显示共有10种转录因子家族的基因差异表达响应Cd胁迫,其中包括C2H2、MYB、WRKY和bZIP等转录因子家族,这些转录因子家族显著响应重金属胁迫表达.通过转录组测序分析栾树Cd胁迫后的响应机制,结果表明,栾树通过特有的应激响应Cd胁迫,表达特异性基因达到高Cd抗性,该结果可为进一步研究栾树响应Cd胁迫的分子机制提供基因转录层面的研究基础.
- 何其浩周韬孙吉康王平白磊刘志明
- 关键词：镉胁迫差异表达基因
- 蚬壳花椒种子总RNA提取方法比较与优化被引量：5
- 2017年
- 蚬壳花椒种子中富含油脂、多糖和多酚类等成分复杂的次生代谢物质,影响其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或者总RNA降解严重。本实验采用改良CTAB法、TRNzol法、试剂盒法、传统CTAB法提取总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳,核酸蛋白检测仪检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行比较与分析。结果表明:TRNzol法、试剂盒法、传统CTAB法未能从蚬壳花椒种子中提取到总RNA,改良CTAB法能提取完整性较好、纯度较高的RNA,28S及18S条带清晰整齐,D260/D280值为2.07,提取的总RNA适用于RT-PCR实验,可以为后续的分子生物学研究奠定了基础。
- 荣健周韬王平孙吉康彭昕
- 关键词：总RNA提取改良CTAB法RT-PCR
