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蜂毒PLA2原核表达及溶血作用研究: 2024年; [目的]蜂毒(Bee_Venom,BV)是天然的动物药,药理效应广泛,成分较为复杂。磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)是蜂毒的重要活性成分和主要过敏原,可与蜂毒肽发挥协同作用,诱发溶血。本研究旨在通过原核系统表达并纯化出蜂毒磷脂酶A2(BvPLA2)蛋白,并通过溶血试验对比蜂毒(bee venom,BV)、蜂毒肽(melittin)以及BvP⁃LA2的溶血效果。[方法]将已构建好的pET28a-BvPLA2融合表达载体转化到大肠杆菌BL21菌株中并通过IPTG低温诱导蛋白表达,对表达产物进行鉴定并纯化获得重组BvPLA2蛋白。采集小鼠眼球全血与生理盐水等体积混合配制成2%的红细胞混悬液,加入不同浓度的BvPLA2蛋白液、蜂毒液及蜂毒肽,通过酶标仪测定溶血率。[结果]经IPTG诱导后的表达产物在约15 kDa的分子量处呈现清晰的条带,与理论推算值一致。超声破碎后在上清及沉淀中均表达出特异性条带,且上清中的表达量与沉淀表达量基本一致。不同浓度的BvPLA2蛋白液均具有溶血效果,溶血率均超过5%,且低浓度BvPLA2溶血率较高。经对比得出,BvPLA2溶血率显著低于蜂毒和蜂毒肽(P<0.05)。[结论]通过原核表达系统成功诱导并纯化出可溶性目标蛋白BvPLA2,且BvPLA2具有一定的溶血效果,但溶血效果显著低于蜂毒和蜂毒肽。; 刘苗苗王兆宇陈龙龙吕建华赵慧婷; 关键词：蜂毒磷脂酶A2 原核表达溶血性

盐胁迫对热带假丝酵母菌株GY8降酚性能的影响: 2020年; 本文旨在检测不同浓度氯化钠胁迫对高效降酚菌热带假丝酵母菌株GY8降解苯酚性能的影响。通过在含有0.1,10,25,50,100 g·L^-1氯化钠的无机盐培养基中培养GY8菌,检测不同氯化钠浓度胁迫对菌OD600值、降解苯酚速率,降酚关键酶的活性的影响。结果表明,GY8菌在含0~100 g·L^-1盐浓度培养基中均可生长,且都有降酚活性。但随着盐浓度增加,GY8菌OD600值和降酚速率及邻苯二酚1,2-双加氧酶酶比活力均呈现抑制趋势,苯酚羟化酶的活性先增强后抑制。当氯化钠浓度超过25 g·L^-1时,抑制作用明显增强。通过本研究可以得出GY8菌可耐受0~100 g·L^-1氯化钠,且氯化钠对GY8降酚活性具有梯度抑制作用。; 吕建华李宏曲文浩贾周英薛智权; 关键词：热带假丝酵母菌氯化钠苯酚羟化酶

磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达被引量：4: 2019年; 为了从磷矿区土壤分离高效溶磷菌,为开发施用于矿区复垦的高效微生物解磷菌肥提供试验基础,利用磷酸钙培养平板筛选磷矿区土壤中的解磷菌,采用PCR法扩增16S rDNA序列进行鉴定,探讨不同碳源、氮源、起始pH值和温度下菌株的生长情况,另外还进一步克隆表达该菌株的碱性磷酸酶。结果显示,经筛选得到1株高活性的解磷菌,16S rDNA鉴定其为成团泛生菌(Pantoea agglomerans);该菌株最佳碳源为甘油、氮源为NH4Cl类无机氮,起始pH值为9,培养温度为33℃;在最适培养条件下,有效溶磷量达到了287.48 mg/L;成功克隆了该菌株中的碱性磷酸酶基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,重组菌裂解液活性为原始菌株裂解液的32.77倍。分离得到的菌株及重组表达的碱性磷酸酶在矿区复垦、农业种植和工业上均具有广泛的应用前景。; 宁清刘迪靳翔弓亚杰薛智权吕建华; 关键词：解磷菌碱性磷酸酶 RDNA

高效降酚真菌的分离、鉴定及特性研究被引量：3: 2016年; 苯酚和酚类化合物是环境中常见的有毒污染物。利用富集、筛选和纯化的方法,从山西省太谷县圣源污水处理厂曝气池中分离得到一株能以苯酚为唯一碳源生长的苯酚降解真菌GY8。采用rDNA ITS区序列分析,鉴定该菌株为热带假丝酵母属。该菌株在48 h内对1.0 g/L苯酚降解率接近100%,在以苯酚为唯一碳源的培养条件下能够耐受1.8 g/L的苯酚。同时,通过设定不同pH值、不同接种量、不同溶解氧条件,对该菌降解特性进行研究。结果表明,该菌最适pH值为6.5,随着接种量的增加降解能力增强,5%接种量可使1.0 g/L苯酚在24 h内降解率达90%以上,有氧条件更利于苯酚的降解。研究表明,热带假丝酵母GY8对处理含酚废水具有良好的应用前景。; 薛智权王向英李宏吕建华; 关键词：生物降解废水处理

气味结合蛋白OBPs在意大利蜜蜂头部表达模式的研究被引量：1: 2021年; 昆虫气味结合蛋白(OBPs)是脂溶性化学物质的载体,参与了嗅觉识别和化学传输等生理过程。本研究利用MEME在线软件对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica OBPs基因家族21条氨基酸序列进行Motif预测分析;采用RT-PCR初步筛选出在意大利蜜蜂头部表达量较高的OBPs基因,然后利用qPCR技术对筛选出的基因进一步分析其在不同日龄内勤蜂头部的表达情况。结果表明,在预测获得的6个motif中,motif 1为21个OBPs所共有,具有极高的保守性,推测该序列元件可能是意大利蜜蜂OBPs与底物结合的区域;表达谱分析结果表明,13个OBPs基因的凝胶电泳条带明显(即在头部的表达量较高),且大多数基因在4日龄时表达量达到最高值,推测这类蛋白可能参与了幼虫信息素和糖类物质的识别过程。本研究结果丰富了蜜蜂OBPs表达特性的研究数据,同时也为探讨昆虫OBPs广泛的生理功能奠定了基础。; 赵慧婷彭竹黄丽郭丽娜杜亚丽吕建华; 关键词：意大利蜜蜂气味结合蛋白荧光定量PCR

高效降酚菌株GY8培养基的优化被引量：1: 2016年; 通过在无机盐培养基中额外添加碳氮源,研究不同碳氮源对热带假丝酵母菌株GY8降酚性能的影响,从而对该菌株培养基进行优化。结果表明,通过添加额外的碳源和氮源均可促进热带假丝酵母菌株GY8的生长。采用的不同碳源中,最适碳源为甲醇,其最适浓度为4 g·L^(-1)。采用的不同氮源中,有机氮源比无机氮源更加有利于热带假丝酵母菌株GY8对苯酚的降解。有机氮源中,酵母膏比蛋白胨更有益于菌株GY8对苯酚的降解,其最适浓度为0.5 g·L^(-1)。; 吕建华李宏薛智权; 关键词：热带假丝酵母生物降解

中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBP14的表达及配体结合特性分析被引量：2: 2021年; 【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫寄主定位、产卵地选择等行为中发挥着重要作用,明确中华蜜蜂Apis cerana cerana AcerOBP14与配体的结合特性有助于阐明中华蜜蜂嗅觉识别的分子机制。【方法】通过qRT-PCR测定OBP14在20日龄中华蜜蜂成年工蜂、20日龄中华蜜蜂成年雄蜂、中华蜜蜂采粉蜂和意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica采粉蜂触角中的表达量。构建原核表达载体pET28a/AcerOBP 14,表达并分离纯化重组蛋白AcerOBP14。利用荧光竞争结合实验检测AcerOBP14与37种气味配体化合物的结合特性。【结果】qRT-PCR分析发现,OBP14在中华蜜蜂采粉蜂触角中的表达量极显著高于20日龄中华蜜蜂成年工蜂和雄蜂以及意大利蜜蜂采粉蜂中的。荧光竞争结合实验表明,AcerOBP14与蜂王信息素、告警信息素、那氏信息素及多种植物挥发物都具有结合能力,其中与β-罗勒烯的结合能力最强,解离常数Ki=0.297μmol/L。【结论】AcerOBP14的配体结合谱较宽,暗示其可能参与了中华蜜蜂的多种生理行为反应,且在中华蜜蜂的采粉行为中发挥着重要作用。; 彭竹黄丽赵淑果吕建华赵慧婷; 关键词：中华蜜蜂气味结合蛋白蛋白纯化

一株富油微藻的鉴定及其脂肪酸成分分析被引量：3: 2016年; 富油微藻在生物柴油应用方面具有良好的应用前景,分析其脂肪酸的含量和成分对其有效利用具有理论指导意义。采用扩增18S r RNA片段对本试验所分离得到的一株富油微藻进行分子生物学鉴定,并分别用50%,65%和80%三种不同浓度的甲醇、乙醇和丙酮溶液作为溶剂,采用索式提取法抽提藻油,然后采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析藻油中脂肪酸的含量及成分,并确定最佳的提取方案。结果表明,18S r RNA序列显示,该微藻属于角毛藻Chaetoceros dichaeta。有机溶剂抽提藻油时,50%甲醇的抽提效果最佳,提取效果随甲醇浓度增加而降低。乙醇的提取效果跟甲醇类似,而丙酮的提取效果随浓度提高有所改善,但总体效率不高。在最佳提取条件下,藻油产率达到了451.6 mg·g-1干藻。该角毛藻油中脂肪酸主要为饱和的14碳和16碳长链脂肪酸,含量分别为23.96%和68.58%。研究认为:该微藻属于角毛藻类,甲醇为比较适合的提取该微藻藻油的溶剂;该角毛藻富含长链脂肪酸,在生物柴油等绿色能源行业具有良好的应用价值。; 薛智权吕蕊李宏吕建华; 关键词：角毛藻

一株苯酚降解菌株的筛选鉴定及特性研究被引量：6: 2018年; 为了从焦化废水活性污泥中筛选出高效降酚的细菌,以对废水中苯酚进行生物处理。以苯酚为唯一碳源,从太谷县某焦化厂活性污泥中筛选苯酚降解菌,同时通过Plackett-Burman试验设计,结合正交试验分析,确定该菌株降解苯酚的最佳条件,通过酶活性测定推测菌株降解途径。结果从活性污泥中分离得到1株苯酚降解菌株B10,经分析16S rDNA序列和构建系统进化树,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属细菌。通过利用Plackett-Burman试验设计,结合正交试验分析,确定该菌株降解苯酚的最佳条件为:酵母膏10 g·L^(-1),乙醇4 g·L^(-1),初始接菌量2.5%,培养温度30℃,硫酸镁1 g·L^(-1)。当以苯酚为唯一碳源时,菌株B10中仅有邻苯二酚1, 2-双加氧酶活性被检测到,因此推测,该菌株通过邻位途径降解苯酚。结果表明,B10菌具有降解苯酚能力,对于治理含酚废水具有应用潜力。; 任瑞凡刘永阳曲文浩孔令腾李潇潇薛智权吕建华; 关键词：苯酚

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吕建华

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