鲁凤娟
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：四川大学轻纺与食品学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金四川省科技计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生化学工程更多>>
- 核糖体工程技术选育米尔贝霉素高产菌株被引量：4
- 2018年
- 本实验室中保存的一株从土壤中分离得到的米尔贝链霉菌(Streptomyces milbemycinicus)27号菌株所产米尔贝霉素A3和A4的初始产量分别为61.0和23.8μg/m L。以该菌株为出发菌株,采用核糖体工程技术,结合紫外诱变技术,对米尔贝霉素产生菌米尔贝链霉菌进行诱变,并以链霉素耐受为筛选压力进行筛选。经过诱变后对单菌落进行摇瓶复筛,其中正突变株中米尔贝霉素产量最高的菌株编号是R2-6-5,其米尔贝霉素A3和A4的产量分别是105.2和38.8μg/m L,较原始菌株分别提高了72.5%和63.3%,且遗传稳定。最后,对产量变化较大的11株突变株基因组中rsm G基因和rsp L基因进行突变位点分析,发现在rsp L基因内均未发生突变,rsm G基因均发生突变。本研究表明,链霉素抗性降低的突变菌株确实都在相关基因内发生突变,且核糖体工程结合紫外诱变的诱变方式效果良好,能够快速有效的提高米尔贝链霉菌生物合成米尔贝霉素的能力。
- 鲁凤娟侯燕燕李晓广何林凌褚以文夏海洋田永强
- 关键词：复合诱变链霉素
- 高产角蛋白酶耐盐菌Bacillus sp.K-18的筛选及发酵特性研究被引量：6
- 2016年
- 通过酪蛋白初筛、羊毛降解复筛,选出一株高效产角蛋白酶耐盐菌K-18,结合菌株的形态学观察和生理生化特性,鉴定该菌为Bacillus sp.。对其进行产酶发酵条件优化,得出最佳培养基配方为:葡萄糖5.9 g/L,胰蛋白胨10.1 g/L,最佳培养条件为:培养温度39℃,初始培养基pH值8,培养时间60 h,在此条件下,菌株发酵液角蛋白酶活力达到289.9 U/m L。该耐盐角蛋白酶在盐腌皮脱毛工业方面具有一定的应用前景。
- 侯燕燕汤城岸鲁凤娟张鹤铭龙秀锋张帅田永强
- 关键词：耐盐菌角蛋白酶发酵特性
- 芽孢杆菌胞内丝氨酸蛋白酶ISPr的克隆表达及脱毛应用被引量：2
- 2018年
- 蛋白酶广泛应用于洗涤剂、食品加工、制革和羽毛降解等行业。本研究以从新疆的盐碱地土壤中筛选出的高产蛋白酶菌株LCB10为出发菌株。一种新的胞内丝氨酸蛋白酶ISPr,通过PCR技术扩增出目的基因片段,将获得的目的基因与大肠杆菌表达载体p ET30a连接,构建重组表达载体p ET30a-ispr。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)得到基因工程菌。在37℃下,用IPTG诱导ISPr的表达。酶谱法和蛋白酶活力测定结果表明该丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达。ISPr的相对分子质量约为35k D,在7%的Na Cl浓度下,具有86%的蛋白酶活力。将蛋白酶ISPr应用于山羊皮的脱毛,初步结果显示该蛋白酶具有脱毛效果。
- 侯燕燕鲁凤娟李晓广何琳凌王志宽田永强
- 关键词：克隆表达脱毛
- 一株具有抗菌活性耐盐芽孢杆菌B-11的分离鉴定及发酵工艺优化被引量：2
- 2016年
- 目的旨在从盐碱土壤中分离获得一株耐盐细菌B-11,对其进行分类鉴定及抗菌活性优化及抗菌特性研究。方法基于形态学分析和16S rRNA基因序列对菌株进行分类鉴定。以金黄色葡萄球菌为指示菌,采用双层平板法对菌株B-11发酵液特性进行研究,并通过发酵培养基的正交优化试验,获得菌株产抗菌活性物质最佳的发酵培养条件。通过对菌株B-11基因组次级代谢产物合成基因的分析,研究其基因组上的功能基因。结果结合形态学和分子鉴定表明该菌为Bacillus属成员,在0-4%的Na Cl浓度范围内生长良好,为耐盐细菌。该细菌发酵上清液对蛋白酶K和链霉蛋白酶敏感,对pH、温度和紫外光具有良好的耐受性。通过正交优化得到菌株B-11最适发酵条件为:可溶性淀粉15g/L,黄豆粉15g/L,NaCl 15g/L,p H为自然pH,接种量为1.5%,发酵温度为34℃或37℃,优化后发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径较优化前提高25.5%。利用基因组测序及次级代谢产物合成相关基因分析,发现Bacillus sp.B-11基因组中含有非核糖体肽合成酶(NRPS)基因,并结合该菌次级代谢产物对蛋白酶的敏感性,表明该菌具有产多肽类化合物的潜力。结论盐碱土壤中的极端微生物资源可作为抗菌活性物质的潜在新来源。
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- 关键词：抗菌活性功能基因
- 耐盐芽孢杆菌B11抗菌活性物质的分离纯化及其特征分析被引量：2
- 2016年
- 对耐盐芽孢杆菌B11产生的抗菌活性物质进行了分离纯化及特性研究。从盐碱土壤中分离得到一株对金黄色葡萄球菌具有强拮抗活性的耐盐芽孢杆菌B11,其发酵液中抗菌活性物质具有良好的热稳定性、p H稳定性和紫外光照稳定性,100℃加热1 h,抑菌活性仅下降11.0%,且在p H为3和11环境下,抑菌活性也仅下降11.4%和10.9%,对酸碱环境具有耐受性。发酵液经预处理、离心、阳离子阴离子交换层析,经正丁醇抽提和半制备高效液相色谱得到活性物质A1和A2,其中A1分子量为1423.8 u且带有多电荷,氨基酸分析仪鉴定A1为非核糖体多肽(NRPS),对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为8.0μg/m L;A2活性很弱且含量较低,初步鉴定为小分子抗菌物质,分子量为373 u。耐盐芽孢杆菌B11的抗菌代谢产物应用于食品防腐具有很大的潜力。
- 张帅邱鹏龙秀锋侯燕燕鲁凤娟张鹤铭田永强
- 关键词：分离纯化NRPS
- 响应面法优化超声波辅助提取米尔贝链霉菌中米尔贝霉素A3和A4的工艺研究（英文）
- 2018年
- 本文报道了超声波辅助提取米尔贝链霉菌中米尔贝霉素A3和A4的产量的方法,采用反向高效液相表征米尔贝霉素A3和A4的产量,并通过响应面法来优化提取工艺。对提取时间(X_1)、超声功率(X_2)和占空比(X_3)进行了三因素三水平BoxBehnken设计,以获得米尔贝霉素A3(Y_1)和A4(Y_2)的最佳产量。研究表明,最佳超声波辅助提取条件为:溶剂为乙酸乙酯,料液比0.8,提取时间30min,超声功率110W,占空比40%和提取温度10℃。在此提取条件下米尔贝霉素A3和A4的最大产量分别为312.5和174mg/g,分别是传统提取方法产量的2.3和2.5倍。
- 鲁凤娟侯燕燕张鹤铭夏海洋田永强
- 关键词：超声辅助提取
