陈阳
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 基于多肽-泊洛沙胺纳米颗粒载体的呼吸道黏膜 mRNA疫苗研究
- 2023年
- 目的设计并制备mRNA-多肽-泊洛沙胺纳米颗粒(mRNA peptidepolymerternary complex,mRNA-PPTC),考察其理化特性、体外和体内呼吸道组织相关细胞递送效率、免疫后小鼠特异性抗体诱导能力。方法通过体外转录分别制备编码萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase,F-luc)、增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)和新冠病毒受体结合域蛋白(receptorbinding domain,RBD)的mRNA,利用动态光散射法检测mRNA-PPTC的粒径、多分散系数、Zeta电位。通过透射电镜观察纳米颗粒形态。将F-lucmRNA-PPTC及对照组制剂分别转染至人支气管上皮细胞(16 human bronchial epithelial cell,16HBE)、鼠源树突状细胞(dendritic cell2.4,DC2.4)、鼠源巨噬细胞(mouse leukemia cells of monocyte macrophage,RAW264.7),检测荧光素酶报告基因转染效率和细胞活性;将EGFPmRNA-PPTC及对照组制剂转染至16HBE细胞,使用荧光显微镜观察EGFP表达情况。利用活体成像技术考察F-lucmRNA-PPTC在小鼠呼吸道的转染效率。选用编码RBD蛋白的mRNA作为疫苗抗原模型,通过酶联免疫吸附实验检测免疫后小鼠血清中抗原特异性免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中抗原特异性分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,sIgA)水平。结果成功制备粒径约100nm近球形且均一稳定的弱阳离子mRNA-PPTC纳米颗粒;mRNA-PPTC能有效转染16HBE、DC2.4、RAW264.7细胞,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),并且细胞毒性较低;mRNA-PPTC通过滴鼻免疫后,在小鼠鼻部和肺组织中检测到F-luc报告基因的有效表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);在初免后第28天的小鼠血清和BALF样品中,能分别检测到高效价的RBD抗原特异性IgG和sIgA,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论mRNA-PPTC纳米颗粒有良好的体外mRNA递送能力且细胞毒性较低;滴鼻给药后在小鼠上下呼吸�
- 杨七华刘宇恒张丹丹李超龙艳碧陈阳张靖靖张卫军罗萍鲁东水程平肖琴邹全明
- 关键词：黏膜疫苗
- 微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化及蛋白激酶C活性的影响(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景:转录因子NF-E2相关因子2是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子,有实验表明转录因子NF-E2相关因子2能被蛋白激酶C家族中的众多成员磷酸化,为进一步研究微波辐射造成氧化应激损伤的产生机制,是否可以从转录因子NF-E2相关因子2途径观察微波辐照对抗氧化调控系统的影响?目的:分析微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2的磷酸化及蛋白激酶C活性的影响。设计:观察对比实验。单位:解放军第三军医大学劳动卫生学教研室。材料:血管内皮细胞株,H332PO4,Protein-A Sepharose(Sigma公司),转录因子NF-E2相关因子2单抗(H-300,Santa Cruz),蛋白激酶Cα单抗(Santa Cruz),玻纤滤膜(Whatman公司)凝胶扫描系统(Gel Doc 2000,Bio-Rad),液闪测定仪(LKB-117瑞典)。方法:实验于2003-03/07在解放军第三军医大学劳动卫生学教研室电磁辐射生物效应研究室完成。①转录因子NF-E2相关因子2磷酸化分析:血管内皮细胞以DMEM培养液培养至细胞生长至旺盛期,加入32Pi孵育标记2h,将细胞培养瓶置于37℃水浴盒中,在反射系数近似零的微波暗室接受微波辐照,为辐照组,辐照平均功率密度为30mW/cm2,辐照时间30min;以未接受辐照的细胞为对照组。采用免疫共沉淀-放射自显影法测定转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平,用凝胶扫描系统对细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平进行半定量分析,对照组细胞直接进行分析。②蛋白激酶C蛋白激酶活性分析及表达量测定:辐照组及对照组细胞培养方法、条件,辐照方式、剂量、条件同前。于辐照后2,4,8,24h裂解细胞,提取胞浆和胞膜蛋白,采用r-32P-ATP标记液闪法进行蛋白激酶C活性测定;采用凝胶扫描系统对蛋白条带灰度进行半定量分析;对细胞进行蛋白激酶C免疫细胞化学染色后于光镜下观察细胞胞浆的着色程度,对照组均直接给予测定和观察。主要观察指标:①辐照组�
- 钟敏陈阳张广斌余争平
- 关键词：血管内皮细胞蛋白激酶C
- 微波辐照对培养血管内皮细胞Nrf2的磷酸化作用
- 2006年
- 目的研究微波辐照对参与抗氧化应激反应调节的转录因子(Nrf2)的磷酸化作用。方法培养的ECV304细胞接受微波辐照,辐照后2,4,8,24 h进行指标测定。用免疫共沉淀-放射自显影法测定Nrf2磷酸化水平;用Western blot、r-32P-ATP标记液闪法分别测定蛋白激酶C(PKC)表达量和活性。结果微波辐照后2,4,8 h,Nrf2磷酸化水平比未辐照细胞明显增强(P<0.05),4 h达到峰值,24 h回复到正常水平;同时PKC的蛋白表达量在辐照后2,4,8 h也比对照细胞明显增加,PKC的活性在这一时段比对照分别增加了36%,93%,47%(P<0.05)。辐照后24h,PKC含量和活性均下降到正常水平。辐照后PKC含量和活性变化与Nrf2磷酸化水平的变化在时效上有一致性。结论微波辐照可引起培养血管内皮细胞Nrf2磷酸化水平在一定时段内增强,该过程与PKC激活有关。
- 钟敏陈阳张广斌余争平
- 关键词：微波辐照血管内皮细胞
