胡红元
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：贵州医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析被引量：6
- 2016年
- 目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。
- 胡红元任春丽尚小丽陈明明王宇王涛吴建伟
- 关键词：家蝇克隆表达内参基因
- 家蝇抗真菌肽衍生物MAF-1C抗白色念珠菌活性研究被引量：4
- 2016年
- [目的]探究家蝇抗真菌肽衍生物MAF-1C结构特点及抗白色念珠菌活性。[方法]采用氨基酸替代法设计MAF-1A衍生肽MAF-1C,生物信息学分析其理化特性,微量液体稀释法、菌落计数法检测体外抗白色念珠菌活性,扫描电镜观察对菌细胞结构的影响。[结果]MAF-1C为非跨膜阳离子线状多肽,带8个正电荷,二级结构以α螺旋为主。对白色念珠菌具有抗菌活性,MIC、MFC值分别为0.2 mg/m L和0.5 mg/m L,2×MIC浓度的MAF-1C从作用一开始就发挥抗菌作用,其作用后白色念珠菌细胞表面出现明显的凹陷、裂痕,之后细胞皱缩、裂解死亡,并且菌细胞损伤程度与肽浓度及作用时间呈正相关。[结论]MAF-1C结构参数及对白色念珠菌的抗菌活性均显著优于模板肽,对比模板肽改造后的肽阳离子电荷增加了6个,总平均疏水值(GRAVY)由-1.081升高到0.588,不稳定系数由42.27降低到5.83,MIC由0.6 mg/m L降低到0.2 mg/m L,MFC由0.7 mg/m L降低到0.5 mg/m L,其可通过破坏白色念珠菌细胞结构发挥抗菌作用。
- 陈明明王涛林小金胡红元罗振华吴建伟
- 关键词：家蝇抗真菌肽分子设计白色念珠菌抗真菌活性
- 秸秆对家蝇幼虫木质纤维代谢酶的诱导、表达及木质纤维降解菌的筛选
- 目的：研究家蝇对农业秸秆的消化利用及体内相关糖苷水解酶基因的诱导表达，筛选体内降解纤维素、木质素、半纤维素的共生菌，为今后家蝇作为资源化昆虫对秸秆等生物质能的合理利用和开发奠定科学基础。 方法: 1.使用含30％麦麸...
- 胡红元
- 关键词：家蝇幼虫共生菌纤维素降解秸秆利用
