高敏
- 作品数：6 被引量：11H指数：3
- 供职机构：中国科学院过程工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金生化工程国家重点实验室开放基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 坛紫菜藻红蛋白粗提技术的研究被引量：3
- 2011年
- [目的]快速、有效、大批量地提取藻红蛋白。[方法]以坛紫菜为原料,采用溶胀法、化学试剂法和搅切法3种粗提技术,以藻红蛋白的提取得率、纯度和提取时间为参数对3种方法进行比较。[结果]溶胀法采用0.01mol/LTris-HCl(pH8.0)浸提9h,藻红蛋白得率为9.71mg/g,纯度(A565/A280)为0.45;化学试剂法在0.100mol/LSDS溶液作用4h时,藻红蛋白得率为24.35mg/g,纯度(A565/A280)为0.22左右;搅切法采用搅切速度18000r/min作用6min,藻红蛋白得率达到23.11mg/g,纯度(A565/A280)为0.30。[结论]综合比较,搅切法提取藻红蛋白效率高,藻红蛋白得率和纯度较好,处理量较大,是一种十分有效的粗提方法。
- 王翠芹高敏顾铭
- 关键词：坛紫菜藻红蛋白破壁技术
- Q Sepharose FF分离藻红蛋白的工艺研究
- 2012年
- [目的]建立Q Sepharose FF分离藻红蛋白的工艺方法并验证其放大可行性。[方法]通过对洗脱条件、上样体积以及洗脱流速的优化,确定最佳分离工艺条件;在确定的工艺条件下,将上样体积与柱体积等比例放大。[结果]Q Sepharose FF分离藻红蛋白的最佳工艺条件为:将30 ml坛紫菜提取液加载到8 ml Q Sepharose FF柱上,以1 ml/min的流速使用添加0-0.10-0.35-1.00 mol/L NaCl的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液(pH 6.0)分步洗脱,收集0.35 mol/L NaCl溶液洗脱时的色谱峰。在此条件下R-藻红蛋白的回收率和纯度系数(A565/A280)分别为44.3和1.15。按照该工艺,将75 ml藻红蛋白提取液加载到20 ml Q Sepharose FF柱上进行分离,发现分离效果没有发生明显变化。[结论]使用Q Sepharose FF介质能够分离坛紫菜提取液中的藻红蛋白且该工艺易于放大。
- 张彬王翠芹高敏张轶顾铭王长海
- 关键词：离子交换色谱QSEPHAROSEFF藻红蛋白
- 贻贝粘蛋白创面修复敷料体外细胞毒性的检测方法被引量：3
- 2013年
- 背景:在贻贝粘蛋白创面修复敷料的体外细胞毒性检测中,由于蛋白分子表面带正电荷,1∶9的浸提比会使细胞聚团而导致测定产生误差,影响测定结果。目的:在已有标准的基础上,根据贻贝粘蛋白特殊的性质及使用状态,改进贻贝粘蛋白创面修复敷料的浸提比例或前处理方法。方法:①浸提液法:将贻贝粘蛋白创面修复敷料与细胞培养液分别以1∶9、1∶131浸提比例制备浸提液,分别以贻贝粘蛋白创面修复敷料浸提液、天然乳胶浸提液、高密度聚乙烯浸提液及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞。②直接接触法:分别以蒸馏水、贻贝粘蛋白创面修复敷料溶液、二甲基亚砜及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞。结果与结论:采用浸提比1∶9测定样品体外细胞毒性时,细胞产生聚团作用,不适用于样品毒性的检测;调整浸提比为1∶131后,絮凝作用和细胞聚团现象明显降低,提高了检测结果的可信度,显示样品无细胞毒性。直接接触法显示样品无细胞毒性。采用经调整过的浸提液法或直接接触法均可适用于贻贝粘蛋白创面修复敷料体外细胞毒性的检测。
- 刘茜兰华林兰华林高敏顾铭
- 关键词：粘蛋白类生物相容性材料生物敷料细胞毒性
- 混合模式吸附色谱分离纯化贻贝粘蛋白的研究被引量：4
- 2010年
- [目的]研究高强度琼脂糖基质混合模式吸附介质分离纯化贻贝粘蛋白的方法并探讨分离机理。[方法]考察在不同酸碱度、不同离子强度下,贻贝粘蛋白在凝胶上的静态吸附、动态吸附及解吸附过程。[结果]氯化钠浓度从0增加到0.5mol/L,介质和蛋白之间平衡吸附量变化在6%以内;而酸碱度对吸附的影响较大,当酸碱度跨越蛋白等电点时,单位酸碱度(pH)最大吸附量变化百分比达23%。[结论]介质的复合配基与贻贝粘蛋白间表现了离子交换、疏水作用、氢键吸附的混合吸附作用,采用酸碱度高于等电点的洗脱液洗脱贻贝粘蛋白,得到纯度为90%的贻贝粘蛋白。
- 范恒瑞高敏Jan-Christer Janson顾铭
- 关键词：纯化
- Q Sepharose FF分离藻红蛋白的工艺研究(英文)被引量：1
- 2012年
- [目的]建立Q Sepharose FF分离藻红蛋白的工艺方法并验证其放大可行性。[方法]通过对洗脱条件、上样体积以及洗脱流速的优化,确定最佳分离工艺条件;在确定的工艺条件下,将上样体积与柱体积等比例放大。[结果]Q Sepharose FF分离藻红蛋白的最佳工艺条件为:将30ml坛紫菜提取液加载到8ml Q Sepharose FF柱上,以1ml/min的流速使用添加0-0.10-0.35-1.00mol/LNaCl的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液(pH6.0)分步洗脱,收集0.35mol/LNaCl溶液洗脱时的色谱峰。在些条件下,R-藻红蛋白的回收率和纯度系数(A565/A280)分别为44.3和1.15。按照该工艺,将75ml藻红蛋白提取液加载到20ml Q Sepharose FF柱上进行分离,发现分离效果没有发生明显变化。[结论]使用Q Sepharose FF介质能够分离坛紫菜提取液中的藻红蛋白且该工艺易于放大。
- 张彬王翠芹高敏张轶顾铭王长海
- 关键词：离子交换色谱QSEPHAROSEFF藻红蛋白
- 坛紫菜藻红蛋白分离纯化研究
- 2012年
- [目的]建立一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法,并对其分离机理进行探讨。[方法]以坛紫菜的藻红蛋白搅切法提取物为原料,首先通过100和500 kDa的超滤离心管对其进行超滤分离,再在Superose 12色谱柱上以不同种类和不同浓度的流动相对藻红蛋白粗提物进行等度洗脱,分析其分离机理,并优化分离条件。[结果]在0.05 mol/L NaCl等度洗脱的条件下,藻红蛋白在Superose12色谱柱上表现为典型的氢键吸附模式;在优化的条件下,通过超滤-Superose 12氢键吸附分离的方法,可以使坛紫菜藻红蛋白提取物纯度(A565/A280)达到7.98,总回收率52.9%。[结论]该研究结果表明藻红蛋白在Superose 12色谱柱上存在氢键吸附作用,同时,该研究所建立的超滤-Superose 12氢键吸附分离方法是一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法。
- 宋茂谦周天琼高敏王长海Jan-Christer Janson顾铭
- 关键词：藻红蛋白
