薛建红
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤血管特异结合抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性被引量：2
- 2007年
- 目的:检测从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异结合单链抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性,探讨该抗体在癌症诊断和治疗中应用的可能性。方法:将该单链抗体基因插入到含绿色荧光蛋白(EGFP)基因及带有硫氧还原蛋白(Trx)基因的原核表达载体pET-28a(+)/EGFP及pTIG-Trx中,在大肠杆菌中进行表达,并经镍柱(Ni-NTA)纯化。建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型,尾静脉注射纯化的单链抗体-EGFP融合蛋白,通过荧光显微镜观察肿瘤部位及其他器官中EGFP信号,考察该单链抗体的靶向性;同时在裸鼠致瘤部位注射纯化的单链抗体蛋白,观察该单链抗体对肿瘤生长的抑制性。结果:在大肠杆菌中表达了该单链抗体基因片段,并使单链抗体-EGFP融合蛋白得到了很好的表达,经镍柱纯化后得到了电泳级的单一条带。靶向性实验结果显示,单链抗体-EGFP融合蛋白在肿瘤部位得到了富集,而只注射EGFP蛋白的肿瘤组织中荧光很少,并且在裸鼠肺部组织中没有观察到EGFP荧光信号。抑瘤性实验发现,单链抗体处理组移植瘤生长速率与PBS组类似。结论:从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异抗体ScFvH1具有较好的肿瘤血管靶向性,而对肿瘤生长的抑制作用不明显,为进一步研究抗体在肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础。
- 秦玺马航航薛建红胡宝成
- 关键词：肿瘤血管单链抗体靶向性
- 肿瘤特异单链抗体库的构建及肿瘤血管特异性结合抗体的体内筛选被引量：2
- 2007年
- 目的:构建肿瘤组织特异的噬菌体呈现型单链抗体库,用噬菌体体内筛选与肿瘤血管特异性结合的单链抗体,为癌症的诊断和治疗奠定基础。方法:取食道癌、胃癌、脑癌、肺癌、脊髓瘤患者肿瘤组织,提取各肿瘤组织膜蛋白混合后免疫BALB/c小鼠,取鼠脾脏淋巴细胞提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因(VH和VL),经Linker连接形成ScFv基因片段,将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化大肠杆菌TG1,在辅助噬菌体M13KO7的作用下,获得重组噬菌体单链抗体库。以人宫颈癌HeLa细胞致瘤裸鼠为实验模型,用所构建的单链抗体库进行了4轮特异抗体的体内筛选。挑取了24个PCR鉴定为阳性的单链抗体做免疫组化分析,将在HeLa致瘤的组织切片上呈阳性染色、而在对照的肾组织切片上没有阳性染色的单链抗体进行序列测定。结果:选用7株不同的肿瘤细胞系建立裸鼠致瘤模型,以HeLa细胞致瘤裸鼠成瘤效果最好。用所构建的库容量为1.6×106的单链抗体库对肿瘤血管特异结合抗体进行体内筛选,得到1株单链抗体ScFv(VH-linker-VL),命名为ScFvH1。结论:成功构建肿瘤特异单链抗体库,并用此抗体库筛选到与肿瘤血管结合特异性较好的单链抗体,为肿瘤的早期诊断和治疗提供了一条新的技术路线。
- 秦玺田媛胡宝成薛建红
- 关键词：肿瘤血管单链抗体噬菌体展示
